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鲍鱼,位于海参、鱼翅、鱼肚四大海味之首,不但营养丰富,而且还具有很高的药用价值。而占鲍鱼软组织总重量30~40%左右的脏器则一直作为非食用部分被大量的丢弃或加工成低值的产品,这就大大降低了鲍鱼的价值,还造成了严重的环境污染。本文以鲍鱼脏器为原料,采用常规方法辅以超声波提取鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶粗酶液,探讨最佳提取工艺,研究其最佳的酶活测定条件,将所提取的鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶粗酶液通过盐析、透析、冷冻干燥制成鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶粗酶粉末,并对其进行理化分析和酶学特性研究。本论文的主要研究结果如下:1、通过常规提取工艺的单因素试验和正交试验、超声波辅助提取工艺的单因素试验,最后确定了一整套常规方法辅以超声波提取鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶粗酶液的工艺。常规提取方法各因素对酶活影响:料液比、缓冲液pH对提取具有显著性的影响(P<0.05),而浸提时间、缓冲液种类、离心转速对提取的影响不显著。通过常规提取与超声波辅助提取两种方法的比较,可以看出超声波处理有利于鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶粗酶液的提取。最佳提取工艺条件:缓冲液为0.1mol/L pH 3.5乙酸-乙酸钠,料液比1:4,浸提时间4h,超声时间20min,超声功率200W。2、鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶匀浆液的最佳酶活测定条件:检测波长为400nm,缓冲液为pH 3.50.2mol/L磷酸氢二钠-0.1mol/L柠檬酸,底物浓度为35mmol/L,反应温度50℃,反应时间30min。3、通过不同盐析剂对鲍鱼脏器匀浆液的盐析效果的影响,确定选择硫酸铵作为鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶分离提取及初步纯化的盐析剂,并且采用分级盐析方法,选择硫酸铵第一个饱和度为30%,第二个饱和度为80%,能够得到更好的分离β-葡萄糖苷酶的效果。4、鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶匀浆液通过分级盐析、辅以透析等初步分离纯化步骤后,比活力均有一定的提高。该技术路线操作简单、回收率高,是一条设计合理的分离纯化β-葡萄糖苷酶的路线。不同的纯化方法所达到纯化效果不尽相同,如果想要达到更高的纯化倍数,可以通过离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析等方法进一步分离纯化。5、冷冻干燥后的鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶粗酶粉末呈浅黄色。该β-葡萄糖苷酶粉末中主要成分包括:粗蛋白60.58%,可溶性蛋白29.56%,多糖16.34%,水分10.69%,脂质和灰分几乎不存在。造成多糖含量较高的原因是鲍鱼脏器中含有较多的糖蛋白,盐析过程中伴随着β-葡萄糖苷酶一起沉淀下来。6、冷冻干燥后的鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶粗酶粉末的最适温度为50℃,最适pH为3.5,在50℃以下和pH 3.0-6.0范围内,具有较好的热稳定性和pH稳定性,并且能够在4℃冰箱内长时间保存。Zn2+、Cu2+、Ag+对鲍鱼脏器p-葡萄糖苷酶活性有明显的抑制作用;Na+、 K+、Mg2+、Ca2+、Fe2+对酶活性没有明显的影响;Ba2+、EDTA、Mn2+对酶活均有激活作用,其中,Ba2+、EDTA的激活作用较弱,而Mn2-有较强的激活作用。以p-NPG为底物时,动力学常数分别为Km=4.66mmol/L, Vmax=3.79U/L。7、经SDS-PAGE电泳,透析后的鲍鱼脏器p-葡萄糖苷酶能够达到较高的纯度,分子量大概在54.0-76.0kD。