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目的1.检测人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA在宫颈鳞状细胞癌(SCC)、宫颈上皮内瘤变(CIN)及正常宫颈脱落细胞中的表达,探讨hTERTmRNA表达在SCC、CIN诊断中的临床意义。2.检测SCC、CIN及正常宫颈脱落细胞中hTERTmRNA的定量表达水平,探讨hTERTmRNA定量表达与宫颈病变严重程度的关系。3.检测SCC、CIN及正常宫颈脱落细胞中高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)的感染率,并将其与各级宫颈病变脱落细胞中hTERTmRNA表达进行相关性分析,探讨二者在宫颈癌变发生、发展过程中的相互作用。材料和方法1.研究材料:①宫颈癌HeLa细胞株;②临床病例宫颈脱落细胞:收集2008年4月～2008年12月广州医学院附属广东省妇儿医院经临床和病理证实SCC(n=31)、CIN II～III(n=26)、CIN I(n=22)病例,正常(或慢性宫颈炎)宫颈病例(n=21)取自我院因子宫平滑肌瘤或子宫脱垂行全子宫切除者。2.方法:①细胞标本培养、收集及保存:HeLa细胞株:用含10%胎牛血清的DMEM完全培养基培养,选择Hela细胞在1×106拷贝数时收集并冻存于-80℃;临床病例宫颈脱落细胞:收集宫颈脱落细胞双份,一份经无RNA酶磷酸盐缓冲液漂洗后,放入RNA保存液置-20℃冻存或立即进行RNA提取。另一份采用凯普宫颈细胞收集保存系统处理宫颈细胞DNA标本。②采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( real-time fluorescent quantitative RT-PCR)技术,检测Hela细胞株、SCC、CIN II～III、CIN I和正常(或慢性宫颈炎)宫颈脱落细胞中hTERTmRNA的表达及定量水平,后者采用相对定量方法表示,以Hela细胞中的hTERTmRNA表达水平为基数,每一阳性样品hTERTmRNA的定量水平为相对于该表达水平的相对数,即NhTERT ;采用导流杂交基因芯片技术(简称HybriMax)检测SCC、CIN II～III、CIN I和正常(或慢性宫颈炎)宫颈脱落细胞中的HR-HPV感染率。③统计学分析:应用SPSS16.0统计软件处理,样品率的比较采用四格表确切概率法(Fisher’s exact test)、多个样本均数比较采用非参数秩和检验(Kruskal-Wallis法)、相关性分析采用直线和spearman等级相关分析,α< 0.05(双侧)为有统计学差异。结果1.hTERTmRNA在SCC、CINII～III、CIN I和正常宫颈脱落细胞中的表达率分别为80.6%、53.8%、27.3%和9.5%,经确切概率法检验,在SCC、CINII～III宫颈脱落细胞中hTERTmRNA的表达率均显著高于正常宫颈脱落细胞,差异有统计学意义(P< 0.001、P=0.002);2.hTERTmRNA在SCC、CINII～III、CIN I和正常宫颈脱落细胞中的定量水平NhTERT分别为:0.4646～13.7823、0.2278～3.5000、0.0459～0.5480、0.0089～0.0106 ,经秩和检验四组NhTERT比较差异有统计学意义(P< 0.001);NhTERT随着宫颈病变的严重程度加重而增高,经Spearman等级相关分析显示γ= 0.676,(P<0.001),宫颈脱落细胞中hTERTmRNA表达水平与宫颈病变的严重程度呈显著的正相关。3.在SCC、CINII～III、CIN I和正常宫颈脱落细胞中HR-HPV的感染率分别为93.5%、76.9%、54.5%和4.8%,SCC、CINII～III病变中HR-HPV感染与hTERTmRNA表达同时阳性者分别为77.4%和42.6%,均高于正常宫颈4.8%,差异有统计学意义(P< 0.001、P=0.002),hTERTmRNA的表达与HR-HPV感染具有正相关性,(γ= 0.392,P< 0.001),差异有统计学意义;结论1.hTERTmRNA在SCC、CINII～III脱落细胞中的表达高于正常宫颈,提示宫颈脱落细胞中hTERTmRNA的检测,可应用于临床对CINII以上病变的辅助诊断。2. hTERTmRNA在SCC、CINII～III、CIN I和正常宫颈病变脱落细胞中的定量表达水平与宫颈病变的严重程度呈显著的正相关,提示hTERTmRNA定量表达水平的高低可作为宫颈病变严重程度的判别指标。3.宫颈病变脱落细胞中hTERTmRNA表达与HR-HPV感染率呈正相关,提示宫颈HR-HPV感染的致癌机制可能是通过调控hTERTmRNA表达、进一步活化端粒酶所引起。