【摘 要】
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目的:观察不同时间段空气和高氧环境下肺细胞形态的改变、检测细胞凋亡水平和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的变化以及测定P311 mRNA及蛋白表达变化,探讨高氧环
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目的:观察不同时间段空气和高氧环境下肺细胞形态的改变、检测细胞凋亡水平和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的变化以及测定P311 mRNA及蛋白表达变化,探讨高氧环境下肺细胞的功能改变及P311在高氧肺损伤发生发展中的可能机制与作用。方法:通过体外分离培养原代肺泡II型上皮细胞(typeΙΙalveolar epithelial cells,AECⅡ)和肺成纤维细胞(lung fibroblasts,LFs),分别采用透射电镜及免疫荧光法鉴定AECⅡ及免疫组化法鉴定LFs;构建高氧肺细胞损伤模型,通过倒置显微镜观察空气和高氧不同时间段中AECⅡ和LFs细胞形态及迁移率的改变;采用流式细胞术方法测定空气和高氧不同时间段AECⅡ和LFs细胞内活性氧(ROS)和凋亡水平;采用免疫荧光法检测LFs细胞空气和高氧环境下a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)荧光强弱的变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、蛋白印迹(Western Blot)方法分别检测高氧组和空气组不同时间段AECⅡ P311 mRNA及蛋白的表达水平变化。结果:随着高氧时间延长,AECⅡ的迁移水平下降(P<0.01),AECⅡ细胞内ROS含量和凋亡水平明显增加(P<0.01),高氧组AECⅡ细胞中P311蛋白表达明显增加(P<0.01);随着高氧时间的延长,高氧组LFs形态发生了明显的变化,且迁移水平增加(P<0.01),细胞内ROS含量和凋亡水平明显增加(P<0.01),LFs细胞内a-SMA荧光表达增强。结论:高氧可引起肺细胞生长不良,使AECⅡ迁移水平降低,而LFs迁移增加,肺细胞内ROS大量生成,最终引起肺细胞大量凋亡。高氧环境下P311表达增加,提示参与了高氧肺损伤的修复过程。
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