黄精中低极性部分化学成分及其抑菌活性研究

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黄精(Polygonatum sibiricum Red.)为百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum)多年生草本植物,我国大部分地区都有分布。黄精作为传统中药,具有降低血糖、血脂,保护心血管系统,调节和增强免疫功能,延缓衰老,抗炎和抗病毒等重要药理作用。其主要化学成分为黄精多糖、甾体皂苷、蒽醌类、木脂素和黄酮类等化合物。本文研究了黄精总皂苷的提取工艺;采用滤纸片法测定了黄精根茎不同溶剂提取物的抑菌活性;采用硅胶柱层析等方法对黄精根茎的化学成分进行研究;采用气相色谱—质谱联用方法对黄精挥发性成分进行分析。本论文的主要研究成果如下:1.研究了黄精总皂苷的提取工艺采用加热回流法、超声波法和微波法等3种方法提取黄精总皂苷。结果表明:超声法提取黄精总皂苷方法最佳,具有高效、安全、成本低等优点且能保护被提取成分不被破坏。使用超声辅助提取,以人参皂苷Rb1标准品为指标,通过正交实验确定最佳提取温度、料液比和提取时间;通过研究表明,提取温度对黄精总皂苷提取有极显著的影响,提取时间和料液比的影响不显著。确定最优提取工艺为:超声辅助提取,80%乙醇提取2次,提取温度60℃,提取时间30min,料液比1:15。此时提取总皂苷含量在3.4%以上。2.测定了黄精根茎的抑菌活性采用滤纸片法测定黄精根茎不同溶剂提取物的抑菌活性。结果表明:不同溶剂提取物浓度在25mg·mL-1时,除哈维弧菌外,对外其它供试菌株均表现出一定的抑菌活性。总体表现为,中低极性部分抑菌效果好于大极性部分。其中,石油醚萃取物对大肠杆菌有强抑菌活性;氯仿萃取物对金黄色葡萄球菌有强抑菌作用。乙酸乙酯萃取物对肠型点状产气单胞菌有强抑菌作用。正丁醇萃取物只对肠型点状产气单胞菌和杀鲑气单胞菌史氏亚种有抑制作用。水相浓缩液除对杀鲑气单胞菌史氏亚种有抑制作用外,对其它供试菌均无抗菌活性。中低极性部分对杀鲑气单胞菌史氏亚种、肠型点状产气单胞菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为,石油醚萃取物:5mg·mL-1、15mg·mL-1、5mg·mL-1;氯仿萃取物:5mg·mL-1、10mg·mL-1、10mg·mL-1;乙酸乙酯萃取物:20mg·mL-1、10mg·mL-1、10mg·mL-1。3.研究了黄精根茎中低极性部分化学成分利用硅胶柱层析及重结晶等分离纯化技术从黄精根茎中共分离得到6个化合物。利用IR、1H NMR、13C NMR、MS和DEPT等方法确定化合物Ⅰ为β-谷甾醇,化合物Ⅱ为β-胡萝卜苷,化合物Ⅳ为棕榈酸甲酯。化合物Ⅲ可能为甾体皂苷元类,由于只做1H NMR,其结构有待进一步确定。化合物Ⅴ和Ⅵ未做二维谱图,结构待确定。其中化合物Ⅳ棕榈酸甲酯为首次从该植物中发现。4.黄精根茎挥发油组分分析采用水蒸气蒸馏法(SD)结合气质联用(GC-MS)技术对黄精根茎挥发油成分进行分析。从中共鉴定出42种组分,已鉴定挥发油成分占总挥发油含量的92.36%。主要成分包括:正十六酸(26.83%)、十五酸(14.39%)、四吡嗪(7.63%)、1,1-二乙氧基乙烷(6.40%)、1-甲氧基-2-丙基醋酸(2.27%)、对二苯酚(2.58%)、己酸(1.24%)、二乙酰基胺(1.60%)、2-甲基-丙酸乙酯(1.34%)。采用固相微萃取法(SPME)结合气质联用(GC-MS)技术对黄精根茎挥发油成分进行分析。从中共鉴定出46种组分,已鉴定挥发油成分占总挥发油含量的96.37%。主要组分及其百分含量为:苯乙烯(21.48%)、3-羟基-2-丁酮(11.94%)、乙酸(8.13%)、α-蒎烯(7.05%)、2,3-丁二醇(5.32%)、乙酸乙酯(2.67%)、环丙内酯(1.44%)、十三烷(2.38%)、十二烷(2.00%)、(1S,3R,5S,6R)-(-)-5-蒈烷醇(1.17%)。2种方法检出的相同组分只有3种化合物。水蒸气蒸馏法和固相微萃取法检测结果可以互相补充,为更深入研究挥发油组分奠定基础。本论文研究并确定了黄精总皂苷的最佳提取工艺;测定了黄精根茎不同溶剂萃取物抑菌活性,确定了最小抑菌浓度;并从黄精根茎中分离得到6个化合物;采用不同方法提取黄精根茎挥发油成分,用GC-MS技术进行分析,确定了主要的组分及含量。通过以上研究为黄精资源的开发和利用提供了科学依据。
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