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目的：河北省太行山南麓是国内外上消化道癌集中高发地区,食管/责门癌和胃癌的发病率及死亡率占全身恶性肿瘤的70%-80%。早期发现、早期诊断、早期治疗是提高生存率的有效途径。白2001年以来,在高发区大规模开展早期食管/责门癌及癌前病变的筛查工作,成效显示内镜筛查是最有效的筛查方法,但是由于内镜普查不仅需要大量人力物力资源,更主要是内镜操作技术要求较高,难以用于高发区自然人群大规模普查,寻求一种高通量、灵敏度高筛查方法是目前亟待解决的重要课题。肿瘤是一种多基因参与、多步骤发展、内外环境交互作用下形成的复杂疾病。肿瘤发生发展过程中无论是在病变组织中还是体液当中存在着大量与肿瘤相关的差异性蛋白。通过蛋白的动态观察,筛选出用于高发区自然人群初筛工作的高特异性及灵敏度的指标,使内镜检查更具针对性,已成为当前研究热点。飞行时间质谱技术SELDI-TOF-MS及MALDI-TOF-MS(surface enhanced laser desorption-ionization time of flight mass spectrometry, Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry, SELDI-TOF-MS, MALDI-TOF-MS)是目前国际先进的蛋白质组学技术,能检测肿瘤不同发展阶段基因表达的各种蛋白质,从而发现大量具有诊断价值的蛋白标志分子。本研究1应用MALDI-TOF-MS技术检测食管/责门癌前病变及早癌血清中相关差异表达蛋白,构建高发区食管/责门癌及癌前病变血清蛋白质指纹图谱模型。2探索食管/责门癌前病变内镜治疗前后血清蛋白质谱的变化,进一步验证血清中差异蛋白峰,同时寻找作为食管/责门癌前病变及早癌内镜下治疗后复发监测的生物学指标。3通过数据库检索差异蛋白峰寻找与食管/责门癌发生发展相关蛋白,探讨其余肿瘤发生发展的相关性。方法：以太行山南麓食管癌高发区40-69岁人群为研究对象,选取白2010年至2011年河北省磁县、涉县内镜筛查以及河北医科大学第四医院内镜科来自高发区白行行内镜检查病例。共收集食管癌及癌前病变血清样本254例,责门癌及癌前病变血清样本例259例。其中53例食管鳞状上皮轻、中度不典型增生(Esophageal mild dysplasia and moderate dysplasia, EDYS I-II)、92例重度不典型增生／原位癌(Esophageal severe dysplasia and Esophageal carcinoma in situ, EDYSIII/CIS)、53例进展期食管癌(Advanced esophageal carcinoma, AEC),53例责门腺上皮低级别内瘤变(low-grade intraepithelial neoplasia, LGIN),89例高级别上皮内瘤变及早期癌(high-grade intraepithelial neoplasia intramucosal carcinoma, HGIN-IMC)组.60例(invasive gastric cardia adenocarcinoma, IGCA)患者,另随机选取年龄和性别匹配的57例正常对照组(normal, NOR)此外收集食管EDYSⅢ/CIS内镜治疗后12例,责门HGIN-IMC内镜治疗后21例一并纳入本研究。全部病例均经病理组织学确诊。所有血清样本通过磁珠纯化,经MALDI-TOF-MS检测,应用Biomarker Wizard软件识别蛋白峰信息,用SPSS16.0软件对数据进行统计学分析,采用Biomarker Patterns软件对数据处理；1建立早期食管/责门癌及癌前病变诊断模型2寻找内镜治疗前后差异蛋白峰,3进行数据库检索。结果：1通过生物软件分析EDYS Ⅰ-Ⅱ、EDYSIII/CIS、AEC及NOR组间存在差异蛋白峰146个,应用其中的14个蛋白峰建立食管癌及癌前病变血清蛋白指纹图谱模型。对食管癌前病变及癌的特异性90.91%,对EDYS Ⅰ-Ⅱ的灵敏度为100%,EDYSⅢ/CIS灵敏度为89.66%,AEC的灵敏度为81.26%。14个差异蛋白峰经ExPasy数据库检索其中M/Z为2023、1307、1234推测为zinc alpha2glycoprotein、Fibrinogen alpha chain、Glycosyltransferase-like protein LARGE2,其余为未知蛋白。212例EDYSIII/CIS治疗前后有效差异的蛋白峰6个,蛋白峰1563、1590在EDYSIII-CIS治疗前呈上升趋势,治疗后明显下降。蛋白峰8108、8632、8960、32023治疗前呈下降趋势。治疗后明显上升。经ExPasy数据库检索32023、8960推测为zinc alpha2glycoprotein、Apolipoprotein All。3应用生物软件对责门LGIN组、HGIN-IMC组、IGCA and NOR组分析,筛选差异蛋白峰193个,应用其中15个差异蛋白峰建立诊断模型,该模型对责门癌前病变及癌的特异性为100%,LGIN的灵敏度100%,HGIN-IMC的灵敏度85.246%,IGCA的灵敏度93.939%。经ExPasy数据库检索33313、8712、7992推测为Leucine-rich a2glycoprotein(LRG)、fragments of C3a、 platelet factor(PF4),其余可能为未知蛋白。421例HGIN-IMC内镜治疗前后自身配对治疗前后存在有效差异蛋白峰12个。HGIN-IMC治疗前呈上升趋势,治疗后明显降低的蛋白峰4个；1951、1595、1771、2332。治疗前降低,治疗后升高的蛋白峰8个；31069、10289、9317、7992、7786、5918、4103、4660(p<0.05)。经ExPasy数据库鉴定1771、2332、4103、5918、7786、9317、10289推测为Apolipoprotein AIV、 Transgelin4103Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain4、Fibrinogen alpha chain、platelet factor4(PF4)、Vitronectin V10subunit、10kDa chaperonin。结论：1应用WCX联合MALDI-TOF-MS技术通过BPS生物软件建立食管癌及癌前病变血清蛋白指纹图谱模型,该模型可以有效区分EDYS Ⅰ-Ⅱ、 EDYSⅢ/CIS、AEC和NOR组。2通过比较EDYSⅢ/CIS内镜治疗前后差异蛋白峰,进一步验证血清中差异蛋白峰的改变,发现6个有效差异蛋白峰,反向验证了食管癌血清中差异蛋白峰的可重复性。3应用WCX联合MALDI-TOF-MS技术通过BPS生物软件建立责门癌及癌前病变血清蛋白指纹图谱模型,能够有效区分责门LGIN组、HGIN-IMC组、IGCA和NOR组四组。4通过比较HGIN-IMC内镜治疗前后差异蛋白峰,发现12个有效差异蛋白峰。验证了责门癌变过程中血清差异蛋白峰的改变。5根据实验结果分析推测食管/责门癌的发生起始于与EDYS Ⅰ-Ⅱ/LGIN或更早,但并不是所有的EDYS Ⅰ-Ⅱ/LGIN均发生癌变。