负载供者PUVA脾细胞的受者未成熟树突状细胞对移植免疫调节的实验研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lianxingjiehaha
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:1、建立大鼠腹部异位心脏移植模型及原位肝脏移植模型;2、建立体外培养、扩增大鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDc)的方法;3、建立补骨脂素联合长波紫外线照射(PUVA)诱导大鼠脾细胞凋亡的方法,观察imDC吞噬同种PUVA脾细胞(PUVA-SP)的能力以及吞噬后DC生物免疫学特性的变化;4、观察移植术前输注负载供者PUVA-SP的受者imDC(PUVA-SP-DC)对大鼠移植心脏存活的影响,探讨PUVA-SP-DC对移植免疫调节的可能作用机制。方法:1、采用腹腔双血管端侧吻合法建立大鼠腹部异位心脏移植模型;采用改良的二袖套法建立大鼠原位肝脏移植模型;2、体外分离大鼠骨髓前体细胞,在重组大鼠GM-CSF和IL-4的刺激下,培养扩增大鼠骨髓来源imDC,显微镜下观察DC的生长状态,流式细胞仪检测细胞表面分子表达;3、采用PUVA的方法,诱导大鼠脾细胞凋亡,通过流式细胞仪(FCM)检测凋亡的诱导情况,将供者凋亡脾细胞(PUVA-SP)与受者imDC共同培养,应用荧光显微镜,观察DC吞噬同种凋亡细胞的能力,通过FCM检测DC表面分子表达的变化情况,通过混合淋巴细胞反应了解PUVA-SP-DC刺激受者T细胞增殖的能力;4、以DA大鼠为供者、LEW大鼠为受者,心脏移植术前4天经舌下静脉输注不同的细胞。根据输注细胞的不同将实验大鼠分为5组:①Control组:单纯输注PBS;②DC组:输注受者DC细胞;③SP-DC组:输注负载供者脾细胞(SP)的受者DC;④PUVA-SP组:输注供者PUVA处理的脾细胞;⑤PUVA-SP-DC组:输注负载供者PUVA-SP的受者DC。观察各组小鼠移植心脏的存活时间和组织病理学改变,检测受者血清中细胞因子表达及外周血淋巴细胞Foxp3表达状况。结果:1、成功建立了稳定的大鼠腹部异位心脏移植模型和原位肝脏移植模型;2、在GM-CSF和IL-4的刺激下,可从大鼠骨髓培养扩增大量的imDC,在形态上表现为未成熟状态,细胞表面CD80、CD86、OX-6表达较低;3、脾细胞经PUVA处理后,继续培养过夜,可获得70%的凋亡脾细胞;4、荧光显微镜观察显示imDC可有效吞噬同种PUVA脾细胞,吞噬后并不刺激DC的成熟;5、混合淋巴细胞反应显示,PUVA-SP-DC刺激受者T细胞增殖反应的能力较低,PUVA-SP-DC还可诱导受者T细胞Foxp3表达上调,培养上清中的IFN-γ水平较低;6、各组同种异体大鼠移植心脏的平均存活时间(MST)分别是:Control组6.7天,DC组7.8天,PUVA-SP组5.3天,SP-DC 5.5天,PUVA-SP-DC12.4天。PUVA-SP-DC组的MST明显长于其余各组。8、与其余各组相比,PUVA-SP-DC组大鼠血清Th1型细胞因子(IL-2和IFN-γ)的表达最低,而Th2型细胞因子(IL-10和IL-4)的表达显著升高;9、PUVA-SP-DC组大鼠外周血Foxp3表达明显高于其余各组。结论:1、应用显微缝合技术可建立稳定的大鼠异位心脏移植模型;2、应用改良的二袖套法血管吻合法可建立稳定的大鼠原位肝脏移植模型;3、大鼠骨髓细胞在GM-CSF和IL-4刺激下,可培养扩增出能满足实验需求的imDC;4、采用PUVA的处理方法可有效诱导脾细胞凋亡;5、imDC可有效吞噬PUVA处理的凋亡脾细胞(PUVA-SP),PUVA-SP并不刺激DC的表型成熟;6、负载PUVA-SP的DC诱导受者T细胞的免疫低反应性及Foxp3表达上调;7、输注负载PUVA-SP的受者imDC,可延长大鼠移植心脏的存活时间;8、PUVA-SP-DC的共刺激分子表达较低,受者Th1/Th2平衡向Th2方向偏移,移植受者Foxp3+调节性T细胞(Treg)比例增高,可能是移植免疫反应下调的主要机制。
其他文献
通过对冠状动脉粥样硬化性心脏病(以下简称冠心病)的病因病机的研究,总结出其发病的病因病机为寒邪内侵、饮食失调、情志失节、劳倦内伤及年老体虚等因素,病机主分虚实,并进一
随着科学技术的发展,信息化已经渗入到了各个领域当中,企业对会计人员整体素质要求越来越高,高校会计电算化教学也应该适应时代的需要,开展改革和创新,培养出越来越多符合企
学生在听力测试中,1-5小题短对话失分率很高。究其原因:主要受语言因素和非语言因素两方面的影响。本文以高考英语全国卷为例,提出几点备考策略供学生参考,希望能帮助考生在
百家争鸣共享学术盛宴,智慧交锋共话测绘发展。12月3-5日,2011年测绘科学与技术全国博士生学术论坛在信息工程大学测绘学院隆重举行。受邀参加本次论坛的有宁津生、李德仁、李德毅、高俊、王家耀、许其凤、杨
目的研究外周血红细胞参数在冠心病(CHD)及CHD并发高血压(HBP)患者中的变化及临床意义.方法收集2016年1月至2017年7月在武汉大学人民医院确诊为CHD的患者200例(CHD组);CHD并发HBP患
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
针对遗传算法在道路匹配时出现的平行路段匹配跳跃问题,利用距离角度拟合法进行改进。将矢量地图与影像地图叠加作为底图进行辅助判断,避免了导航中单一使用矢量数据信息量不足的情况。实验表明,改进后的算法解决了地图矢量数据不完整时产生的误匹配问题;同时在弯道、U形转弯处、交叉路口、平行路段等处都具有较好的匹配准确度。
不久前 ,省委中心组集中深入学习、讨论了江泽民同志关于“三个代表”的重要论述。本期选发了部分发言稿。望全省各级党组织和广大党员遵照中央和省委的要求 ,深入学习和深刻
"澜湄合作"机制形成以来,逐渐成为"一带一路"倡议下中国周边外交战略的重要组成部分,帮助区域国家内部合作理念、层次、领域不断扩展深入。在此背景下,区域国家多领域合作成