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目的: 本课题的研究目的:研究TiO2纳米管阵列的制备工艺及其生物学特性;研究负载盐酸米诺环素TiO2纳米管阵列的生物学特性;研究负载盐酸米诺环素TiO2纳米管阵列对实验动物短期毒性影响;研究TiO2纳米管阵列负载盐酸米诺环素的抗菌性能;通过上述研究,探讨负载盐酸米诺环素TiO2纳米管阵列对微种植体周围炎的影响。 方法: (1)采用阳极氧化法制备大管径TiO2纳米管阵列,并负载盐酸米诺环素。采用扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察分析TiO2纳米管阵列形态特征。 (2)牙龈上皮细胞的原代培养及鉴定,并将牙龈上皮细胞接种于单纯抛光钛片、TiO2纳米管钛片、负载盐酸米诺环素(80μg)TiO2纳米管钛片、负载盐酸米诺环素(100μg)TiO2纳米管钛片、负载盐酸米诺环素(120μg)TiO2纳米管钛片等五种钛片上,通过观察牙龈上皮细胞在TiO2纳米管钛片上的生长情况、增殖能力及表皮生长因子的合成能力来评价其生物学特性。 (3)选用短期毒性试验(经口途径)对TiO2纳米管阵列负载盐酸米诺环素进行生物相容性评价,通过对Wistar大鼠进行各组钛片浸提液灌胃,对灌胃后大鼠进行脑部、肝脏、肾脏组织的T1、T2、DWI及R2*加权成像扫描与组织病理切片观察各组钛片浸提液对Wistar大鼠重要生命器官的影响。 (4)通过抑菌圈实验研究TiO2纳米管阵列负载盐酸米诺环素前后对牙龈卟啉单胞菌(Pg)、福塞坦氏菌(Tf)和伴放线放线杆菌(Aa)的早期黏附行为的影响,探讨TiO2纳米管阵列负载盐酸米诺环素后的抗菌性能。 结果: (1)本课题实验制成具有稳定晶型管型结构的TiO2纳米管阵列,SEM下观察纳米管阵列排列整齐,直径约为80-100nm,管间无交联,管壁平滑,管壁厚约20nm。 (2)原代牙龈上皮细胞边缘规则,紧密镶嵌成铺路石状,细胞成多边形,大小不等,免疫荧光染色检测角蛋白,可见视野中几乎全部细胞均表现出角蛋白染色阳性;牙龈上皮细胞在TiO2纳米管钛片上生长良好,免疫荧光染色下可见细胞核完整,无核分裂,形态如铺路石状;牙龈上皮细胞在单纯抛光钛片及TiO2纳米管钛片上的增殖能力较强,在负载盐酸米诺环素TiO2纳米管钛片上增殖能力小于单纯抛光钛片及TiO2纳米管钛片(p<0.05),但牙龈上皮细胞在负载不同含量盐酸米诺环素的TiO2纳米管钛片上的增殖能力无明显差异(p>0.05)。 (3)T1加权成像显示,25只Wistar大鼠的脑部结构未见先天异常,经灌胃后,单纯抛光钛片组、TiO2纳米管钛片组、负载盐酸米诺环素(120μg)TiO2纳米管钛片组及生理盐水组大鼠脑、肝脏、肾脏组织未见明显改变,其ADC值、R2*及T2*值改变不明显(p>0.05);TiO2纳米粒子组在灌胃后脑部海马、皮质、及小脑DWI信号均有轻微减弱,ADC值及T2*值稍有增大,而R2*值稍有减少(p<0.05);TiO2纳米粒子组在灌胃后肝脏、肾脏组织DWI信号均有增强,ADC值及T2*值减小,而R2*值增大(p<0.05)。 (4)TiO2纳米管钛片对伴放线放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌及福塞坦氏菌的抗菌活性较差,4小时后对各细菌的抗菌率仅20%左右。若在TiO2纳米管钛片上负载盐酸米诺环素,即负载盐酸米诺环素(120μg)TiO2纳米管钛片,对伴放线放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌及福塞坦氏菌均具有抗菌活性且抗菌性能较强,4小时后的抗菌率高达77%以上;负载盐酸米诺环素(120μg)TiO2纳米管钛片,对伴放线放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌及福塞坦氏菌均具有较好的抑菌性能,其抑菌圈大小与TiO2纳米管钛片组相比有明显差异,且存在统计学意义(p<0.05)。 结论: (1)本课题采用阳极氧化法制备大管径TiO2纳米管阵列,制备出的纳米管排列整齐、管径大小约为100nm。 (2)负载的盐酸米诺环素可将TiO2纳米管表面完全覆盖,并形成光滑表面。 (3)表面负载盐酸米诺环素的TiO2纳米管钛片不影响牙龈上皮细胞的早期附着、增殖及分化,显微镜下可见细胞边缘规则,紧密镶嵌成铺路石状,细胞成多边形。 (4)含有不同含量(80μg,100μg,120μg)的盐酸米诺环素对细胞的增殖及分化影响无明显差异,120μg的盐酸米诺环素可以均匀覆盖在TiO2纳米管钛片的表面,且保持表面的光滑性。 (5)负载盐酸米诺环素的TiO2纳米管阵列浸提液没有短期全身毒性,TiO2纳米管阵列负载盐酸米诺环素后对机体并无明显毒性作用,尤其是对脑组织及肝脏组织均未见有明显毒性。 (6)TiO2纳米管钛片具有轻微的抑菌作用,但若在其上负载盐酸米诺环素,其抗菌性能可大大提高。若将负载盐酸米诺环素的TiO2纳米管应用于微种植支抗颈部,则微种植体颈部可在一定程度上早期抑制Aa、Pg、Tf的黏附,让周围软组织细胞,如牙龈上皮细胞优先附着并在其上增殖分化,则有利于微种植体在无细菌干扰的条件下形成良好的种植体周围软组织生物封闭,预期可在一定程度上提高微种植体的成功率。