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目的:本文旨在研究黄芩素对LPS/ATP诱导的RA患者PBMCs分泌炎症因子的影响,并以P2X7/TLR4炎症相关通路为中心进一步探讨黄芩素抑制炎症因子分泌的可能机制,进而明确P2X7/TLR4炎症相关通路在RA患者发生、发展中的作用机制,为黄芩素应用于临床提供依据。方法:1.以50例RA患者为研究对象,收集相关临床指标,检测CRP及ESR,并进行DAS28评分;同时选取30例性别和年龄相匹配的健康志愿者作对照,ELISA检测血浆中细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。2.通过密度梯度离心法分离PBMCs,用RPMI-1640完全培养基重悬细胞,于37℃、5%CO2的培养箱中培养,备用。药物方法处理如下:(1)空白组:不给予任何药物干扰;(2)给药组:用100 ng/ml的脂多糖(LPS)预处理1小时,然后分别用黄芩素(0、20、40、80μM)处理12小时,最后用1mM的ATP处理1h即可。3.ELISA法检测单核细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。4.检测黄芩素对RA患者外周血单核细胞P2X7/NLRP3和TLR4/NF-κB等相关信号通路的影响:(1)RT-PCR法检测单核细胞P2X7、NLRP3、TLR4 mRNA的表达;(2)蛋白印迹法检测P2X7、NLRP3、TLR4、NF-κB、IκB等蛋白的表达。结果:1.与健康对照组相比,RA患者血浆中的炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显升高,有显著性差异(~*P<0.05)。2.LPS/ATP处理可诱导促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的释放;黄芩素可减轻IL-1β、IL-6和TNF-α的释放。与对照组相比,~#P<0.05;与LPS+ATP处理相比,~*P<0.05。3.黄芩素能降低P2X7/NLRP3和TLR4/NF-κB相关信号通路的活性,从而影响炎症因子的分泌水平,但几乎不影响p38、JNK和ERK1/2的表达。结论:黄芩素可减轻LPS/ATP诱导的RA患者PBMC炎症反应,这可能是黄芩素通过介导P2X7/TLR4通路而发挥作用的,并提示黄芩素有可能通过抑制炎症相关途径作为常规抗风湿药物的佐剂。