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目的:
维生素E是生育酚类和三烯生育酚类的总称,属脂溶性维生素。维生素E作为抗氧化剂之一,目前研究已经证明维生素E可保护神经系统、骨骼肌和视网膜等组织免受氧化损伤。支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分引起的慢性气道炎症和气道高反应性疾病,是当今世界威胁公共健康最常见的慢性肺部疾病,其患病率在全球逐年上升。随着社会和环境的发展,越来越多的研究认为哮喘与人类进食的营养素的缺乏或比例失调有关。其中脂溶性维生素E获得了极大的关注。维生素E按甲基位置分为α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ生育三烯酚。不同维生素E的异构体,其作用也不同。其中γ-维生素E被认为与哮喘密切相关。本实验旨在利用卵白蛋白致敏、激发建立哮喘小鼠气道炎症反应模型,探讨γ-维生素E(gamma-tocopherol,γ-T)与哮喘的相关性,评价γ-T对哮喘后气道炎症炎症因子嗜酸性粒细胞趋化因子、干扰素γ的影响,探讨γ-T对哮喘的治疗作用及机制,为γ-T应用于临床提供理论依据。
方法:
1、实验动物选用中国医科大学盛京医院动物实验中心提供的4周龄健康Balb/c小鼠(清洁级,雄性,体质量20-24.5g)。
2、按照随机分组原则将小鼠分为4组:哮喘组、地塞米松组、γ-T组、正常组,每组10只。
3、①哮喘组分别于第0、7、14天腹腔注射0.5 mL致敏液(含OVA10ug和氢氧化铝凝胶2 mg)进行致敏;从第21天开始为激发阶段,将小鼠置于密闭玻璃箱(20cm×20cm×20cm,下同)内,给予雾化吸入25g/L的OVA溶液30 min,每日雾化1次,共激发1周;
②γ-T组以上述同样的方法用OVA进行致敏和激发,并在每次激发前1h分别予以灌胃2mg(0.002ml)γ-T及0.1ml玉米油;
③地塞米松组则在每次激发前1h分别予以腹腔注射地塞米松0.1mg,经口灌胃0.1ml玉米油;
④正常组于第0、7、14天腹腔注射0.5 mL生理盐水;从第21天开始给予生理盐水雾化吸入30 min,每日雾化1次,共雾化1周。
4、ELISA法测定各组血清及肺泡灌洗液中eotaxin、IFN-γ的含量。各组实验数据以(x)±s表示,采用SPSS17.0软件进行统计学分析。用单因素方差分析检验组间差异, P<0.05具有统计学意义。
5、HE染色观察各组小鼠肺组织切片的病理特征。
结果:
一、各组激发后哮喘发作情况
哮喘多在激发后30 min内发作,哮喘组小鼠出现口唇发绀、呼吸急促,腹部翕动,烦躁不安,活动频繁,少动,肺部可闻及哮鸣音等表现,而γ-T干预组发作程度有所减轻,地塞米松组发作程度明显减轻。正常组小鼠行动敏捷,未见异常。
二、肺组织HE染色(×400)
哮喘组小鼠气道壁及气道平滑肌明显增厚,支气管外可见大量炎性细胞浸润,主要以单核及嗜酸性细胞为主;地塞米松组小鼠气道壁及气道平滑肌轻度增厚,支气管外可见少量炎性细胞浸润;γ-T干预组小鼠气道壁及气道平滑肌中度增厚,支气管外可见中量炎性细胞浸润。
三、血清及肺组织中eotaxin及IFN-γ含量
1、小鼠血清eotaxin水平正常组5.5123±2.0160 ng/L,哮喘组9.3657±1.7734ng/L,地塞米松组6.6943±2.4367 ng/L,γ-T组8.9943±1.7193 ng/L。哮喘组血清eotaxin水平与正常组相比,P<0.05,有统计学差异;地塞米松组血清eotaxin水平与哮喘组相比,P<0.05,有统计学差异;γ-T组血清eotaxin水平与哮喘组相比,P>0.05,统计学差异不明显;γ-T组血清eotaxin水平与地塞米松组比较,P>0.05,统计学差异不明显。
2、小鼠肺泡灌洗液eotaxin水平正常组7.8125±1.8592 ng/L,哮喘组13.7820±2.1364 ng/L,地塞米松组9.3310±1.4781ng/L,γ-T组9.0770±1.5686 ng/L。哮喘组肺泡灌洗液eotaxin水平与正常组相比,P<0.05,有统计学差异;地塞米松组肺泡灌洗液eotaxin水平与哮喘组相比,P<0.05,有统计学差异;γ-T组肺泡灌洗液eotaxin水平与哮喘组相比,P<0.05,有统计学差异;γ-T组肺泡灌洗液eotaxin水平与地塞米松组比较,P>0.05,统计学差异不明显。
3、小鼠血清IFN-γ水平正常组219.2520±12.5061 pg/ml,哮喘组173.5330±11.2543 pg/ml,地塞米松组208.9560±14.1622 pg/ml,γ-T组193.8380±15.4348 pg/ml。哮喘组血清IFN-γ水平与正常组相比,P<0.05,有统计学意义;地塞米松组血清IFN-γ水平与哮喘组相比,P<0.05,有统计学意义;γ-T组血清IFN-γ水平与哮喘组相比,P<0.05,有统计学意义;γ-T组血清IFN-γ水平与地塞米松组比较,P>0.05,统计学差异不明显。
4、小鼠肺泡灌洗液IFN-γ水平正常组269.7690±13.1055 pg/ml,哮喘组187.1690±12.0902 pg/ml,地塞米松组265.4350±15.1208 pg/ml,γ-T组227.2310±18.4282 pg/ml。哮喘组肺泡灌洗液IFN-γ水平与正常组相比,P<0.05,有统计学意义;地塞米松组肺泡灌洗液IFN-γ水平与哮喘组相比,P<0.05,有统计学意义;γ-T干预组肺泡灌洗液IFN-γ水平与哮喘组相比,P<0.05,有统计学意义;γ-T组肺泡灌洗液IFN-γ水平与地塞米松组比较,P>0.05,统计学差异不明显。
结论:
γ-维生素E通过上调血清及肺组织IFN—γ,下调肺组织eotaxin,减轻哮喘小鼠气道炎症反应。
γ-T对哮喘有一定的治疗价值。