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运用实时荧光PCR检测技术对乳及乳制品中牛、羊、大豆、谷物及植物源性成分进行分析检测,以鉴定乳及乳制品的真实属性。在建立稳定的单重实时荧光PCR检测方法基础上,研究确立多重实时荧光PCR检测方法,实现乳及乳制品中多种目标物种基因的高通量快速筛查检测。本课题研究的主要内容和结果如下:(1)乳及乳制品DNA提取方法研究。本研究比较了异硫氰胍结合苯酚-氯仿法、改良试剂盒法和磁珠法这三种方法所提取乳及乳制品DNA的质量。结果证明,改良试剂盒法提取的核酸质量最高,本研究后续PCR反应中样本DNA提取均采用改良试剂盒法进行提取。(2)实时荧光PCR检测体系的建立。分别以牛cytb基因、羊12S rRNA基因、大豆lectin基因、谷物rbcL基因、植物tRNAleu基因作为靶基因合成特异性的引物与探针,建立各组分的单重实时荧光PCR检测体系,并设计实验验证合成引物和探针的特异性。通过验证,确定所合成的牛、羊、大豆、谷物及植物源性成分的引物与探针只针对目标物种DNA有扩增曲线,未出现非特异性扩增,说明所建立的PCR反应体系特异性良好。(3)多重实时荧光PCR检测体系的建立。通过对实时荧光PCR反应体系和反应参数优化,成功建立了单重、双重以及三重实时荧光PCR检测方法,实现牛、羊、大豆、植物、谷物源性各成分之间的实时同步检测。(4)方法特异性与灵敏度测试。通过阳性和阴性对照组DNA检测验证反应体系的通用性与特异性,并应用十倍倍比稀释目标物种DNA进行方法灵敏度测试,确定方法检出限。通过测试,牛、羊、大豆源性成分PCR检测体系的灵敏度均为0.1 ng的模板DNA,0.1%(w/w)的模拟样品;谷物源性、植物源性成分PCR检测体系的灵敏度均为0.1 ng的模板DNA,0.5%(w/w)的模拟样品。(5)市售样品的测试。通过收集市面上的乳与乳制品进行方法验证与样品测试,在收集的65份样品,其中在4份羊乳制品中检测出牛源性成分;在5份牛乳制品中检出植物源性成分和大豆源性成分。本研究建立了稳定高效的乳及乳制品中牛、羊源性主成分以及可能掺假掺杂的大豆、谷物、植物成分的实时荧光PCR检测体系。方法灵敏度高、特异性强,且可实现多重测试,适用于乳及乳制品真实属性的筛查检测。本研究所建立的方法为乳及乳制品监管提供可靠有力的技术手段,具有重大的经济效益与社会效益