本研究针对东海原甲藻（Prorocentrum donghaiense）和中肋骨条藻（Skeletonema costatum）这两种东海常见赤潮藻,研究了其增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA）的体外表达和抗体制备方法,为建立赤潮藻快速、高效、特异的免疫学检测方法奠定了基础。我们首先依据东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA基因的测序结果,利用DNAStar搜索开放阅读框（Open Reading Frame, ORF）并翻译成氨基酸序列;对东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA的氨基酸序列进行比对,选择特异性高的区域作为目标区,将两者的氨基酸序列按照最优密码子原则转译为基因序列;然后对东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA基因序列片段进行基因合成。利用基因工程技术,将合成的PCNA基因连接到PUC57质粒载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株进行基因克隆;通过筛选培养后DH5α菌株,获得有目的基因插入的质粒;运用双酶切技术将含有目的基因的片段插入到pGEX-6P-1载体上转化BL21菌株;筛选含有目的基因的单克隆菌株并进行培养后,加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导目的基因表达;利用超声波破碎经诱导表达的菌体,按照谷胱甘肽-S-转移酶（GST）亲和层析纯化蛋白质的方法,过柱纯化目的蛋白;用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法检测获得的目的蛋白。检测结果证明,本实验成功运用基因工程技术在国际上首次获得了在体外表达的东海原甲藻和中肋骨条藻的PCNA,并且其纯度大于85%,达到作为抗原免疫的要求。在以上工作基础上,以东海原甲藻为对象,进一步开展了其抗体制备技术的研究。我们将东海原甲藻PCNA蛋白片段与弗氏佐剂充分乳化后免疫小鼠;经过4次常规免疫和4次强化免疫后,取被免疫小鼠尾部血清,进行间接酶联免疫反应（iELISA）检测。检测结果显示,本实验成功获得了以东海原甲藻PCNA为抗原的多克隆抗体,且其效价大于80000,能够用于制备单克隆抗体。