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大白菜(Brassica campestris L. ssp.pekinensis)原产于中国,是我国蔬菜栽培中分布最广,种植面积最大的蔬菜作物之一。大白菜软腐病是大白菜生产中的三大主要病害之一,主要由胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种(Erwinia carotovora subsp.carotovora)引起。由于大白菜资源中缺少抗性材料,以及对植物抗病机制认识的匾乏,软腐病抗病育种一直是蔬菜育种的重大难题。近年来植物基因工程等生物技术的进步和成熟,特别是一些抗病基因在植物抗病性改良方面的成功应用,为大白菜抗病育种提供了一条新的、更有效的途径。Harpins是植物革兰氏阴性病原细菌分泌的一类富含甘氨酸、不含半胱氨酸、亲水和热稳定蛋白质的总称。外源施用能诱导对真菌、细菌和病毒病害的广谱抗性。本研究通过花粉管通道法和花序渗透法将胡萝卜软腐欧文氏菌的hrpNEcc基因导入大白菜,期望获得抗病转基因植株,为大白菜的抗病育种奠定理论基础。研究结果如下：1.根据已经发表的序列设计特异性引物,从胡萝卜软腐欧文氏菌中克隆出hrpNEcc基因,经上海生工测序后登陆Genbank进行BLAST比对,结果证明与原始基因序列相似性达到93%,蛋白一致性达到98%。2.构建了含有CaMV 35组成型启动子且可转录hrpNEcc基因的植株表达载体pBBBast-hrpNEcc并将其导入农杆菌EHA105中；3.探索了大白菜花粉管通道法的转化条件。结果表明植株的基因型和导入时间对转化率均有影响。对于导入时间而言,授粉后24h导入外源基因的转化率高于授粉后12h。对于基因型而言,A19-12品系bar基因和hrpNEcc遗传转化率均高于二牛心品系。总体而言,最佳转化方法为采用A19-12品系进行24h处理。4.大白菜转基因植株T0代通过抗性筛选、PCR和PCRsoruthon blot验证得到6株转基因植株,其中二牛心4株,A19-12 2株。