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目的:喉癌是耳鼻咽喉一头颈外科常见的恶性肿瘤之一。相关研究发现,肿瘤的发生是一个复杂的过程,与细胞增殖和细胞凋亡失衡相关,并受细胞内多种因素控制,细胞凋亡一直是肿瘤研究的热点。Caspase作为介导细胞凋亡的一类重要蛋白,其家族中最重要的一员Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3)是细胞凋亡过程中的关键蛋白酶。Livin是一种特殊的细胞凋亡抑制剂,属于凋亡蛋白抑制因子(IAP)家族。本实验从蛋白水平探讨Livin和Caspase-3这两种蛋白在喉癌组织中表达及其与喉癌细胞凋亡关系,以进一步探讨其在喉癌发生、发展过程中的变化规律及临床病理特征的关系,为今后喉癌患者预防、预后评估及基因治疗提供可能的实验性理论依据。
方法:31例喉癌组织标本取自承德医学院附属医院耳鼻咽喉科自2008年1月至2010年12月住院手术的声门上型喉癌患者共31例喉癌组织标本,所有肿瘤组织均经病理学确诊为鳞状细胞癌,15例声带息肉组织标本做对照,并经病理证实为炎症及部分正常粘膜。应用免疫组化(SP法)检测Lvin和Caspase-3蛋白在喉癌中的表达情况,同时用TUNEL检测喉癌细胞凋亡率并与免疫组化结果进行对比。Livin,Caspase-3的表达并采用Volm双评分法进行判定。TUNEL染色结果判定计数凋亡指数(AI)。所有数据结果经Excel数据库整理,应用SPSS13.0统计软件完成。以P＜0.05为差异在统计学上有显著性意义,P＜0.01为差异在统计学上有非常显著性意义。
结果:
1.Livin在喉癌组织中的表达高于声带息肉组织(P＜0.01)。在31例喉癌标本中,Livin阳性率为67.74％;在15例声带息肉组织中,其表达仅有1例为弱阳性(6.67%)。
2.Livin与临床病理指标间的关系:31例喉癌组织中,有淋巴结转移组(N+)8例,Livin全部表达阳性,阳性率为100%,高于无淋巴结转移组(N0)的56.52%,在统计学上有显著性差异(P＜0.05)。在喉癌组织临床分期中,Ⅱ、Ⅱ期组有14例,Livin表达阳性有9例,阳性率为64.29%,临床Ⅲ、Ⅳ期组有17例,Livin表达阳性有12例,阳性率为70.59%,在统计学上无明显差异(P＞0.05)。据恶性肿瘤组织分化程度分为高分化组和中低分化组,高分化组有15例,Livin表达阳性有9例,阳性率为60.00%,中低分化组有16例,Livin表达阳性有12例,阳性率为75.00%,在统计学上无明显差异(P＞0.05)。
3.Caspase-3在喉癌组织中的表达低于声带息肉组织(P＜0.05)。在31例喉癌标本中,Caspase-3阳性率为51.61%。在15例声带息肉组织中,其表达阳性率为86.67%。
4.Caspase-3与临床病理指标间的关系:本实验31例喉癌组织中,有淋巴结转移组(N+)表达Caspase-3阳性有7例,阳性率为87.50%;无淋巴结转移组(No)表达Caspase-3阳性有9例,阳性率为39.13%,在统计学上有显著性差异(P＜0.05)。在喉癌组织临床分期中,Ⅰ、Ⅱ期组中Caspase-3表达阳性有11例,阳性率为78.57%,临床Ⅲ、Ⅳ期组中Caspase-3表达阳性有5例,阳性率为29.41%,在统计学上有显著性差异(P＜0.05)。据肿瘤组织分化程度分为高分化组和中低分化组,高分化组中Caspase-3表达阳性有11例,阳性率为73.33%,中低分化组有中Caspase-3表达阳性有5例,阳性率为31.25%,在统计学上有显著性差异(P＜0.05)。
5.喉癌组织中凋亡的表达凋亡指数即AI值为4.09±0.83,15例声带息肉组织中凋亡指数为24.26±1.01,AI在声带息肉组明显高于喉癌组,在统计学上有显著性差异(P＜05)。
6.Livin表达阳性的21例喉癌组织中,Caspase-3阳性10例(阳性率47.62%);Livin表达阴性的10例喉癌组织中,Caspase-3阳性6例(阳性率60.00%)。相关性分析显示,Livin与Caspase-3在喉癌组织中表达呈显著负相关(r=-0.448,P＜0.05)。
7.喉癌组织中,经相关性分析显示,Livin的表达与TUNEL阳性细胞数呈显著负相关,差异具有统计学意义。(r=-0.415,P.05)。
8.喉癌组织中,经相关性分析显示,Caspase-3的表达与TUNEL阳性细胞数呈显著正相关,差异具有统计学意义。(r=0.790,P＜0.05)。
结论:
1.喉癌组织、声带息肉组织中Livin蛋白和Caspase-3蛋白都有不同程度的表达。
2.Livin蛋白在喉癌组织中的定性表达明显高于声带息肉组织,具有统计学意义。
3.Caspase-3蛋白在喉癌组织中的定性表达明显低于声带息肉组织,具有统计学意义。
4.Livin蛋白在喉癌组织中的表达情况与该喉癌淋巴结转移有相关性,与该喉癌的临床分期、病理分级无关。而Caspase-3蛋白在该喉癌组织中的表达情况与该喉癌淋巴结转移、临床分期以及病理分级有相关性。
5.喉癌组织细胞凋亡率与声带息肉组细胞凋亡率的差异具有统计学意义,且声带息肉组细胞凋亡率明显高于喉癌组。
6.在喉癌组织中Livin蛋白表达与Caspase-3蛋白表达呈负相关;喉癌组织中Livin蛋白表达与喉癌组织细胞凋亡率呈负相关;Caspase-3蛋白表达与喉癌组织细胞凋亡率呈正相关。
7.在喉癌组织中Livin高表达和Caspase-3低表达可能与喉癌的发生、发展有关。