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目的：膀胱癌是泌尿外科系统最常见的恶性肿瘤，膀胱移行细胞癌占其90％以上。目前临床上广泛应用膀胱镜检查、活组织检查及尿脱落细胞学检查，前2项为诊断膀胱癌的金标准，但属于有创性检查，不宜在人群中作普查项目；后者虽属无创但其敏感性低，且易造成假阳性，故在早期诊断膀胱癌中价值不大。为此寻找一种高敏感性、高特异性、简便、快速、费用低、无创性的检测方法以早期诊断膀胱癌及其术后复发具有重要意义。本研究利用巢式RT-PCR方法检测人膀胱移行细胞癌T24细胞、膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞CK20mRNA的表达及意义。为膀胱癌早期诊断和术后监测提供一种新的有效手段。
方法：1.体外培养人膀胱移行细胞癌T24细胞，提取RNA，利用普通RT-PCR及巢式RT-PCR方法，检测其CK20mRNA的表达。2.收集临床60例膀胱移行细胞癌患者、10例泌尿系其他肿瘤患者及5例泌尿系感染患者的尿脱落细胞，利用普通RT-PCR及巢式RT-PCR方法分别检测其CK20mRNA的表达。利用HE染色法进行尿脱落细胞学检测。3.通过统计学方法分析普通RT-PCR及巢式RT-PCR分别检测膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞中CK20mRNA表达与肿瘤分期及分级的关系；分析对比巢式RT-PCR检测CK20mRNA和尿脱落细胞学检查及分析对比巢式RT-PCR检测CK20mRNA和普通RT-PCR检测CK20mRNA；分析普通RT-PCR圾巢式RT-PCR分别检测膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞CK20mRNA初发与复发的关系。
结果：1.利用普通RT-PCR及巢式RT-PCR方法均能检测出人膀胱移行细胞癌T24细胞CK20mRNA表达；2.60例膀胱移行细胞癌患者中普通RT-PCR检测CK20mRNA结果表达阳性数为43例，灵敏度为71.7％，对照组15例检测结果表达阳性数为2例，特异度为86.7％；巢式RT-PCR检测CK20mRNA结果表达阳性数为54例，灵敏度为90.0％，对照组15例检测结果表达阳性数为2例，特异度为86.7％；尿脱落细胞学检测结果表达阳性数为18例，灵敏度为30.0％，对照组15例检测结果表达阳性数为3例，特异度为80.0％。对比巢式RT-PCR检测CK20mRNA和尿脱落细胞学检查，可以认为这两种方法对于膀胱移行细胞癌的检测有显著性差异（P<0.05），前者要优于后者；对比巢式RT-PCR检测CK20mRNA和普通RT-PCR检测CK20mRNA，可以认为这两种方法对于膀胱移行细胞癌的检测有显著性差异（P<0.05），前者要优于后者。3.在利用普通RT-PCR检测不同分级膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞CK20mRNA比较中得出：G1患者20例中有13例CK20表达阳性，阳性率65.0％；G2患者22例中有16例表达阳性，阳性率72.7％；G3患者18例中有14例表达阳性，阳性率77.8％。CK20表达随着病理分级的增高而增高，但G1和G2之间，G2和G3之间的差异无统计学意义（P>0.05）；在利用巢式RT-PCR检测不同分级膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞CK20mRNA比较中得出：G1患者20例中有17例CK20表达阳性，阳性率85.0％；G2患者22例中有20例表达阳性，阳性率90.9％；G3患者18例中有17例表达阳性，阳性率94.4％。CK20表达随着病理分级的增高而增高，但G1和G2之间，G2和G3之间的差异亦无统计学意义（P>0.05）。4.在利用普通RT-PCR检测不同分期膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞CK20mRNA比较中得出：在28例非肌层浸润性膀胱癌（Ta-T1）患者的尿液中，16例有CK20表达，阳性率57.1％；而在32例肌层浸润性膀胱癌（T2-T4）中，27例有CK20表达，阳性率84.4％，明显高于非肌层浸涧性膀胱癌，差异具有统计学意义（P<0.05）；在利用巢式RT-PCR检测不同分期膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞CK20 mRNA比较中得出：在28例非肌层浸润性膀胱癌（Ta-T1）患者的尿液中，22例有CK20表达，阳性率78.6％；而在32例肌层浸润性膀胱癌（T2-T4）中，32例有CK20表达，阳性率100％，明显高于非肌层浸润性膀胱癌，差异具有统计学意义（P<0.05）。5.在利用普通RT-PCR检测36例初发膀胱移行细胞癌患者的尿液中，有21例CK20表达，阳性率58.3％；而在24例复发膀胱移行细胞癌患者的尿液中，有22例CK20表达，阳性率91.7％，明显高于初发膀胱移行细胞癌患者，差异具有统计学意义（P<0.05）；在利用巢式RT-PCR检测在36例初发膀胱移行细胞癌患者的尿液中，有30例CK20表达，阳性率83.3％；而在24例复发膀胱移行细胞癌患者的尿液中，有24例CK20表达，阳性率100％，明显高于初发膀胱移行细胞癌患者，差异具有统计学意义（P<0.05）。
结论：巢式RT-PCR方法检测膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞CK20mRNA具有较高的敏感性，是一种可靠的检测手段。