黄鳝(Monopterus albus Zuiew)肉质鲜美、营养丰富,深受消费者喜爱,并在深加工和保健品开发上具有极大的开发潜力。由于黄鳝供需矛盾日益突出,其人工繁殖以及人工养殖尤为重要。黄鳝是典型的肉食性鱼类,蛋白酶是其最主要的消化酶,对蛋白酶的相关研究,不仅对黄鳝的摄食性能和消化特点等方面研究有重要帮助,同时可对黄鳝配合饲料的科学化、系列化提供重要理论依据。因此,本实验对于黄鳝的人工饲养,提高产量,节约成本,解决日益突出的供需矛盾有重要意义。 蛋白酶是目前工业用酶的主要酶制剂之一,在食品、日化、医药等方面应用广泛。在人们倡导绿色、环保、天然消费的今天,含磷洗涤剂和食品化学添加剂逐渐被禁用,这给天然酶制剂的使用带来更大空间。而目前,天然蛋白酶的来源非常有限,动物蛋白酶主要是猪胰蛋白酶,由于资源短缺,现仅用于医药。鉴于蛋白酶的应用广泛且来源有限,开发新的蛋白酶源迫在眉睫。 黄鳝内脏一直作为下脚料没有被很好利用,随着我国黄鳝养殖业的不断发展,产量不断增加,按1kg鳝鱼0.3kg内脏计算,我国每年将产生100万吨左右的鳝鱼内脏,这样巨大的资源如不回收利用,不仅造成资源浪费,更会污染环境。因此,黄鳝内脏蛋白酶的研究可开发新的蛋白酶源,有效解决蛋白酶制剂紧缺问题,同时更为黄鳝的综合开发提供新的途径。 本文主要从黄鳝肠道蛋白酶的分离纯化、性质和相关应用等方面进行了研究,现将结果总结如下: 1.黄鳝蛋白酶的分离纯化 黄鳝肠道经蒸馏水冲洗,组织绞碎,离心,正丁醇脱脂,硫酸铵盐析,沉淀溶解和透析得粗酶液。将粗酶液过DEAE-琼脂糖离子交换柱层析,收集活性峰、透析、干燥浓缩。再将所得样品经Sephacryl S-200凝胶柱层析,收集活性峰,干燥后得蛋白酶纯品,将其进行SDS-PAGE和等电聚焦电泳,均显示为单一蛋白质条带。SDS-PAGE和Sephacryl S-200测得蛋白酶分子量分别为26KDa和25.5KDa,等电聚焦电泳测得酶的等电点为6.2。蛋白酶的活性回收率为9.8%,纯化倍数为245倍。 2.性质研究 由分离纯化得到蛋白酶纯品后,测得其最适温度为55℃,温度在20℃到40℃酶活性保