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目的观察疏肝健脾方药对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞及Kupffer细胞LXRα、FAS mRNA及蛋白表达的调控作用，探讨非酒精性脂肪性肝病的发病机制及疏肝健脾方药干预的作用。方法1．模型建立与分组SPF级雄性SD大鼠75只，适应性喂养1w后，随机分为5组，每组15只（9只检测常规指标，6只分离肝细胞、Kupffer细胞），分组如下：正常组，模型组，疏肝组，健脾组，合方组。除给予正常组大鼠维持期饲料外，其余各组均采用高脂饲料喂养；各给药组分别给予疏肝方，健脾方及疏肝健脾合方干预；正常组，模型组灌服相应剂量的实验动物饮用水。8w后，行HE染色，油红O染色进行模型鉴定。2．病理观察模型建立成功后，每组取9只，3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，采集肝组织，HE、油红O染色观察肝组织病理变化。3．血清及肝组织相关指标检测腹主动脉取血，静置，离心取上清；适量肝组织匀浆取上清。全自动生化分析仪检测各组大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST含量，肝组织TC、TG含量。4．肝细胞、Kupffer细胞分离及鉴定6只SD大鼠采用胶原酶离体灌注分离肝细胞、Kupffer细胞，台盼蓝染色和流式细胞术鉴定活性和纯度。5．基因、蛋白表达水平检测实时定量PCR法检测LXRα、FAS mRNA在肝细胞、Kupffer细胞中的表达；Westernblot法检测LXRα、FAS蛋白在肝细胞、Kupffer细胞中的表达。结果1．病理观察HE染色正常组大鼠肝小叶轮廓清晰，中央静脉位于肝小叶正中，肝窦结构正常，肝索以中央静脉为轴心呈放射状排列。肝细胞呈多边行，细胞核位于细胞中央，核大而圆，染色明显，细胞质丰富呈红染，无空泡现象。模型组大鼠肝小叶轮廓欠清晰，中央静脉可见，肝窦结构难以辨认，肝索结构紊乱，排列不齐，肝细胞肿胀，细胞核位于细胞边缘，细胞浆内可见大小不等的小空泡，亦可见肝细胞小空泡融合成大泡。各用药组大鼠肝组织结构介于正常组与模型组之间，其中以疏肝组大鼠肝组织结构与正常组最为接近，提示疏肝方能较好地改善NAFLD大鼠肝组织病理状态。油红O染色正常组大鼠肝细胞核呈淡蓝染色，少许肝细胞胞浆内可见散在的红染脂滴。模型组大鼠肝细胞肿胀，细胞核呈深蓝染色，细胞浆可见大量红色脂滴，少许肝细胞脂滴融合成大脂滴。各用药组大鼠肝细胞脂滴含量介于正常组与模型组之间，其中以疏肝组大鼠肝细胞脂滴含量与正常组最为接近，提示疏肝方能较好地改善NAFLD大鼠脂质沉积。2．血脂、肝脂含量测定血脂与正常组比较，模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高（P<0.01），HDL-C含量显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各用药组大鼠血清TC、LDL-C含量显著降低（P<0.05，P<0.01），疏肝组大鼠血清TG含量显著降低（P<0.01），HDL-C含量显著升高（P<0.01）；各用药组组间比较，疏肝组大鼠血清HDL-C含量明显高于健脾组及合方组（P<0.01），LDL-C含量明显低于健脾组及合方组（P<0.05，P<0.01）。提示NAFLD大鼠存在严重的脂质代谢紊乱，疏肝健脾方药可不同程度改善NAFLD大鼠的血脂紊乱状态，以疏肝方作用最为显著。肝脂与正常组比较，模型组大鼠肝组织TC、TG含量显著升高（P<0.01）；与模型组比较，疏肝组大鼠肝脂质肝组织TC、TG含量显著降低（P<0.05）。提示NAFLD大鼠肝脂含量显著升高，疏肝健脾方药可不同程度降低NAFLD大鼠肝脂含量，以疏肝方作用最为显著。3．细胞分离及鉴定分离、纯化后获得肝细胞数量为6.0~7.5×10~8个/肝、Kupffer细胞数量为2.0~3.0×10~7个/肝，台盼蓝染色活力均在95%以上，流式细胞术检测纯度在90%以上。细胞数量、纯度均符合后续检测的要求。4．疏肝健脾方药对NAFLD大鼠肝细胞LXRα、FAS mRNA及蛋白表达的影响与正常组比较，模型组大鼠肝细胞LXRα、FAS mRNA表达明显增高（P＜0.01），分别为正常组的13.08和22.63倍；与模型组比较，各用药组大鼠肝细胞LXRα、FAS mRNA表达均有不同程度下降（P＜0.01，P＜0.05）。与正常组比较，模型组大鼠肝细胞LXRα、FAS蛋白表达均明显增高（P＜0.01）；与模型组比较，各用药组LXRα、FAS蛋白表达均有不同程度下降（P＜0.01，P＜0.05）以疏肝组下降最为显著。提示NAFLD大鼠肝细胞普遍存在着LXRα、FAS蛋白高表达状态，各用药组药物可不同程度下调LXRα、FAS蛋白表达水平，以疏肝方下调最为显著。5．疏肝健脾方药对NAFLD大鼠Kupffer细胞LXRα、FAS mRNA及蛋白表达的影响与正常组比较，模型组大鼠Kupffer细胞LXRα、FAS mRNA表达明显增高（P＜0.01），分别为正常组的4.66和6.82倍；与模型组比较，疏肝组Kupffer细胞LXRα下降明显（P＜0.01）；疏肝组、合方组FAS mRNA均有不同程度下降（P＜0.01，P＜0.05），以疏肝方下降明显（P＜0.01）。与正常组比较，模型组大鼠Kupffer细胞LXRα、FAS蛋白表达均有明显增高（P＜0.01）；与模型组比较，各用药组Kupffer细胞LXRα、FAS蛋白表达均有不同程度下降（P＜0.01，P＜0.05）。提示NAFLD大鼠肝细胞普遍存在着LXRα、FAS蛋白高表达，各用药组药物可不同程度下调LXRα、FAS蛋白表达水平，以疏肝方降低最为显著。结论1.高脂饮食喂养大鼠8w可以成功建立NAFLD大鼠实验动物模型。2. NAFLD大鼠存广泛存在脂质代谢紊乱、肝脏脂肪变性，肝细胞、Kupffer细胞LXRα、FAS mRNA及蛋白的高表达可能参与NAFLD脂质代谢紊乱、肝脏脂肪变性。3.疏肝方及综合方药物能显著抑制NAFLD大鼠肝细胞及Kupffer细胞LXRα、FASmRNA及蛋白表达，可能是疏肝方、综合方药物发挥作用的有效靶点及抗NAFLD重要机制之一。4.肝郁脾虚且以肝郁偏重可能是NAFLD的重要发病机制。