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鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的一新成员,2008年ICTV将DuCV列入圆环病毒属中的暂定种。DuCV感染可导致鸭子羽毛凌乱、生长迟缓、体重减轻等症状。本研究拟从病原学和血清学两个方面对DuCV感染情况进行流行病学调查,研究内容共分为三部分:1、我国自然发病鸭群中鸭圆环病毒的流行病学调查2006-2007年间从我国养鸭业比较集中的山东、江苏、四川、福建、广东五个省份36个鸭群采集临床有发病表现的343只病、死鸭的病理组织样品,以提取的组织DNA为模板通过特异性斑点杂交和PCR方法检测DuCV的感染情况。结果显示上述5个省份均检出了DuCV,病、死鸭中DuCV的个体阳性率为81.63%(280/343),群体阳性率为94.44%(34/36)。此外,还对其中167只病、死鸭样品进行了DuCV和REV共感染的检测,发现DuCV与REV共感染的比率较高,为40.12%(67/167)。研究结果表明我国鸭群中已普遍存在DuCV的感染,且鸭群中DuCV与REV的共感染也普遍存在。2、DuCV Rep蛋白的原核表达及其抗血清制备通过PCR方法扩增DuCV FJ0601株Rep基因的完整ORF,按正确的阅读框架将其克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒转化BL21宿主菌后,经IPTG诱导表达。诱导菌体裂解物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,将表达产物从凝胶中回收,免疫4周龄小白鼠,3次免疫后,采血分离血清。所得抗GST-Rep多克隆抗血清分别与经PCR检验为阳性的病鸭脾脏、胸腺、法氏囊组织的冰冻切片进行间接免疫荧光试验(IFA),结果在感染DuCV的发病鸭三种免疫器官中均可检测到由阳性细胞组成的局部病灶,表明大肠杆菌表达的Rep融合蛋白至少保留了部分天然Rep蛋白的抗原性。3、检测DuCV抗体ELISA方法的建立及初步应用为建立检测鸭圆环病毒抗体的间接ELISA方法,采用PCR技术,扩增DuCV部分Cap基因,构建原核表达质粒pET-32a-Cap。IPTG诱导表达后以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法并初步应用于临床检测。结果显示:DuCV Cap基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达;Western blot检测表明,表达的重组Cap蛋白能与鸭圆环阳性血清发生特异性反应;建立的间接ELISA方法的蛋白最佳包被量为400ng/孔,血清最佳稀释度为1∶50,阳性的Cut-off值为0.298。以建立的间接ELISA方法进行山东省健康鸭群DuCV抗体检测结果表明,健康鸭群中DuCV抗体个体检出率为15.61%(252/1614),肉鸭场的DuCV抗体个体阳性率13.37%(162/1211),群体阳性率为88.89%(16/18);种鸭场的DuCV抗体个体阳性率为22.33%(90/403),群体阳性率为75%(9/12)。实验结果表明该方法具有重复性好、特异性高的特点,可用于DuCV血清学调查。