由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是世界十大病害之一,可引起以番茄、葡萄、草莓等为主的至少200多种植物发病。由于灰葡萄孢菌繁殖速度快,变异性强,转座子活跃,目前该病仍以化学防治为主。但用于防治灰霉病的大多数药剂都已产生抗药性,甚至失效。咯菌腈作为一种新型杀菌剂,作用机制独特,对防治灰霉病有特效,在许多国家均已登记使用,但在我国尚处于早期阶段,近几年逐渐开始用于灰霉病的防治。已有报道咯菌腈作用位点为Ⅲ型组氨酸激酶,作用机制与HOG途径相关,但其毒理学研究尚不透彻。本文通过构建灰葡萄孢菌HOG途径两个分支上游元件组氨酸激酶Sln1和细胞膜感应蛋白Sho1的敲除突变体、回复突变体及双敲突变体,研究它们生物学功能、二者之间互作关系。具体研究结果如下:本文构建了BcSho1 敲除突变体、完全回复突变体及不含跨膜结构域的部分回复突变体,发现该蛋白定位于菌体细胞膜和隔膜上;若去掉该基因跨膜结构域,则游离于细胞质中。BcSho1基因敲除导致菌体较出发菌株对咯菌腈敏感性略有下降,但与其回复突变体之间差异不显著;该基因参与调控灰葡萄孢菌对氧化胁迫、细胞壁胁迫因子敏感性,但与致病性无关;该基因在菌体对菌丝生长、温度敏感性、甘油合成、不同氮源利用能力及对碱性环境适应性方面具有重要作用,且其跨膜结构域参与调节菌体对碱性环境的适应性。构建了BcSln1和BcSho1的单基因敲除突变体及二者的双敲突变体,研究发现BcSln1基因与灰葡萄孢菌对腐霉利的敏感性无关,BcSln1敲除突变体对咯菌腈敏感性没有变化,但在咯菌腈处理条件下菌体甘油合成量上升;而双敲除突变体ΔBcSln1-Sho1对咯菌腈敏感性增加,但甘油产生能力相对于出发菌株B05.10没有明显变化,推测可能存在其它补偿途径或相关机制。BcSln1基因与灰葡萄孢菌致病性和对温度的调控无关,与不同类型化合物产生的渗透、氧化压和细胞壁胁迫因子敏感性变化相关,但存在差异性反应。BcSln1影响菌体对碱性环境的耐受力,但与BcSho1基因没有相互作用。同时发现BcSln1和BcSho1都参与调控灰葡萄孢菌对不同氮源的利用能力,且二者之间存在相互作用。