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东北红豆杉是雌雄异株植物,寻找与东北红豆杉性别连锁的分子标记,具有重要的意义。本实验以延边地区不同性别东北红豆杉植株叶片为材料,利用RAPD技术和AFLP技术寻找与东北红豆杉性别连锁的分子标记,主要研究结果如下: 以东北红豆杉雌雄植株的叶片为材料,用改良的CTAB法提取东北红豆杉基因组 DNA,经电泳检测,提取的DNA纯度和浓度高,能够获得较好的扩增效果,能够满足RAPD和AFLP技术对东北红豆杉性别进行研究。 以东北红豆杉雌株叶片基因组DNA为材料,对其RAPD反应体系进行了优化,结果如下:总反应体系为20μL,其中模板DNA10 ng,Mg2+2.0 mmol·L-1,引物15 pmol·μL-1,dNTP0.2 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μL,以重蒸水补充至20μL。 利用245个RAPD引物对不同性别的东北红豆杉基因组DNA进行了RAPD分析研究,结果在245条随机引物中,有52个引物可以扩增出3条以上清晰的条带。其中有5个引物在东北红豆杉雌雄基因池中出现了差异,重复试验,仅引物OPD15在雄株上扩增出一条1300bp左右的特异带,这可能是一条与东北红豆杉性别紧密连锁的RAPD分子标记。 利用AFLP标记技术,选择64个引物组合,对雌雄东北红豆杉基因组DNA的多态性进行了检测,筛选出与东北红豆杉性别相关的分子标记。其中7对引物组合共提供了11个与东北红豆杉性别相关的分子标记,其中10个与东北红豆杉雌性相关的分子标记,仅1个与东北红豆杉雄性相关的分子标记。