CAF细胞外泌体影响CD LNCAP细胞增殖及凋亡

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目的:外泌体是多泡小体产生并与细胞膜融合,之后释放到细胞外的小囊泡,直径在30-150nm,其含有micro RNA,可以作为细胞间信息交流的载体。本实验的目的在于研究CAF分泌的外泌体对于抗雄治疗的CD LNCAP细胞系增殖及凋亡的影响,并验证CAF来源的外泌体中是否含有与增殖凋亡相关的mi RNAs。方法:运用超速离心的方法提取CAF细胞中的外泌体。应用透射电镜,纳米颗粒追踪分析及蛋白印迹法检测外泌体特异性蛋白CD63鉴定外泌体。运用MTT,细胞周期检测,细胞计数及流式细胞学检测细胞凋亡分析CAF细胞外泌体对CD LNCAP细胞增殖凋亡的影响。从数据库及文献库筛选出mi RNA,并运用q PCR及PCR技术验证其在CAF细胞和NF细胞及其外泌体中该mi RNA的情况。结果:超速离心提取的外泌体电镜下可见圆盘状,杯口状外泌体。从纳米颗粒追踪分析的结果可以看出外泌体直径大小约100nm左右,大部分集中在30-150nm之间。从蛋白印迹法检测外泌体特异蛋白CD 63可以看到外泌体的CD 63拖尾影。由MTT、细胞周期及细胞计数结果可以看出,经过CAF细胞条件培养基及外泌体处理过的CD LNCAP细胞增殖更加明显(P<0.05),而去除外泌体之后的上清液及对照组的结果阴性。由流式细胞学检测结果可以看出,CD LNCAP细胞经过CAF细胞条件培养基及外泌体处理过的CD LNCAP细胞凋亡更少(P<0.05)。通过对数据库及文献库的筛查得到mi R-21,通过q PCR及PCR技术初步确定,CAF细胞中mi R-21表达量明显高于NF细胞中mi R-21,同时在CAF细胞外泌体中也存在miR-21。结论:CAF细胞分泌一定量的外泌体,直径在30-150nm之间,其表面表达CD 63分子。CAF细胞来源的外泌体能够促进去雄前列腺癌细胞系CD LNCAP的增殖并抑制其凋亡。CAF细胞来源的外泌体内含有促进前列腺癌生长的mi R-21,并且可能上述增殖由此介导。
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