目的:乳腺癌在女性恶性肿瘤中已成为最常见的一种,近年来,乳腺癌的发病率在逐年上升,并且呈现出年轻化的趋势,而易转移和高复发以及耐药性的特点使其成为临床治疗的难点。目前,依据分子标志物的不同将乳腺癌主要分为四种亚型:luminal A、luminal B、Her-2、basal-like型。其中,在乳腺癌患者中Her-2亚型占有20%~30%,而且这种类型的乳腺癌更易复发且预后不良。随着对乳腺癌的深入研究,发现乳腺癌中存在着少量的肿瘤干细胞,并且认为乳腺癌干细胞是其耐药性的产生、肿瘤的转移和复发的重要原因之一。研究报道称放疗可以诱导乳腺癌细胞成为乳腺癌干细胞,化疗药物的使用也可以使乳腺癌干细胞富集,从而产生耐药性。在对乳腺癌细胞与乳腺癌干细胞二者相互关系的探索中发现HER2基因过表达可以引起乳腺癌干细胞的增殖,并且与乳腺癌干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)的表达成正相关。另有报道称在MCF-7细胞中HER2过表达时,乳腺癌干细胞数量的增加高达4~5倍。因此对于HER2高表达的乳腺癌产生的耐药性以及转移、复发,认为与其干性特征密切相关。榄香烯是一种广谱的抗肿瘤中药,对多种肿瘤细胞有效,如恶性胶质瘤、白血病细胞、卵巢癌、胃癌以及乳腺癌,其抗肿瘤机制主要有诱导肿瘤细胞的凋亡、阻滞细胞的周期、抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭,并且榄香烯还具有逆转肿瘤细胞的耐药性和对放射增敏的作用。研究发现榄香烯能够抑制Notch-1蛋白从而在胃癌干细胞样细胞中降低其血管形成能力。随后有报道称榄香烯可以抑制胶质瘤干细胞样细胞的多能性分化,并且逆转对替莫唑胺化疗药物的抵抗性,而对其机制的研究仍未明确。在榄香烯对乳腺癌细胞的研究中也发现榄香烯可以促进乳腺癌细胞的凋亡并具有化疗增敏的作用,但对其机制的研究目前甚少。因此,为了观察榄香烯对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,并且检测其对HER2高表达的乳腺癌细胞是否有效,我们通过对MCF-7细胞系与HER2高表达的细胞系MCF-7 HER2进行榄香烯药物的实验,观察其对乳腺癌细胞的迁移能力的影响,并且探讨榄香烯对乳腺癌细胞的干性相关因子的作用,研究在乳腺癌干细胞方面榄香烯对其产生的作用与影响。方法:(1)用MTT法检测榄香烯对乳腺癌细胞MCF-7与HER2高表达的MCF-7HER2细胞的增殖抑制作用,并且经过克隆形成实验再次验证榄香烯对其生长的抑制作用。(2)应用划痕实验检测榄香烯在乳腺癌细胞迁移能力方面的影响,并且应用梯度浓度的榄香烯药物观察其对乳腺癌细胞迁移能力的抑制作用。(3)通过免疫印迹方法验证MCF-7 HER2细胞在蛋白水平高表达HER2,同时检测MCF-7HER2细胞肿瘤干细胞标志物CD44蛋白与CD24蛋白的表达,最后检测榄香烯作用于两种乳腺癌细胞后其肿瘤干细胞标志物的表达水平的变化以及干性相关因子蛋白水平的变化。(4)成球实验进一步验证MCF-7 HER2与MCF-7细胞在榄香烯药物作用下肿瘤干性能力的变化。结果:(1)MTT检测榄香烯对乳腺癌细胞MCF-7与MCF-7 HER2具有显著的抑制作用,并且随着时间和药物浓度的增高对乳腺癌细胞的增殖抑制作用越强。克隆形成实验也验证了榄香烯对乳腺癌单个细胞的抑制作用。(2)通过划痕实验发现榄香烯对乳腺癌细胞的迁移能力具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。(3)免疫印迹方法结果显示,MCF-7 HER2在CD44蛋白、ALDH1蛋白水平的表达显著高于MCF-7,而CD24则低,说明MCF-7 HER2具有肿瘤干细胞的特性,经榄香烯药物处理两种细胞后发现,CD44、ALDH1明显降低而CD24升高,并且肿瘤干性相关因子Oct4、Nanog、Sox2、KLF4、c-Myc、LIN28A的表达水平也明显下调。(4)应用成球实验进一步发现MCF-7 HER2的成球能力也明显高于MCF-7,在榄香烯药物作用后两种细胞的成球体积与数目明显下降。结论:本文通过细胞增殖实验发现榄香烯显著抑制MCF-7细胞与MCF-7 HER2细胞的增殖能力,并且降低细胞的迁移活动能力,通过免疫印迹,表明MCF-7 HER2具有肿瘤干细胞的特性,并且在经过榄香烯药物处理后其干性表达明显下降,证明榄香烯对HER2高表达的乳腺癌具有很好的治疗作用。