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目的： 通过建立阿霉素、庆大霉素和顺铂诱导的大鼠肾损伤模型，探讨多生物标志物联合检测对药物性肾损伤评价的意义；结合中药引起的肾损伤，研究并推荐适用于药物性肾损伤评价的生物标志物联合检测组合。 方法： 1.多生物标志物联合检测组合的建立 1.1.建立阿霉素、庆大霉素和顺铂诱导的大鼠肾损伤模型，检测各取样时间点血清/尿液样本TP、ALB、GLU、BUN、CR以及血脂各项的含量。 1.2.对各处理时间点的肾脏样本切片进行HE/PAS染色，光镜/电镜下观察肾脏组织病理学改变。 1.3.酶联免疫吸附法检测各时间点血清CysC、NGAL、β2-MG，尿液up2-MG、uNGAL、KIM-1、IL-18、L-FABP的含量。 1.4.ROC曲线分析和比较传统肾功能指标BUN、CR和肾损伤标志物TP、ALB、CysC、NGAL、β2-MG、KIM-1、IL-18、L-FABP的检验效能(曲线面积、敏感性、特异性、评阈值)，筛选高效标志物。 1.5.根据样本类型、检测方法和生物学意义组合高效标志物，Logistic回归分析计算预测概率，ROC曲线分析和比较标志物组合的检验效能，筛选高效标志物组合。 2.多生物标志物联合检测组合评价中药肾毒性 2.1.分别建立马兜铃酸、关木通诱导的马兜铃酸肾病大鼠模型和商陆诱导的大/小鼠肾损伤模型，检测各取样时间点血清/尿液样本的TP、ALB、GLU、BUN、CR以及血脂各项的含量。 2.2.对各处理时间点的肾脏样本切片进行HE染色，光镜下观察肾脏组织病理学改变。 2.3.酶联免疫吸附法检测各时间点血清CysC、NGAL，尿液uNGAL、KIM-1、IL-18的含量。 2.4.ROC曲线分析和比较传统肾功能指标BUN、CR和肾损伤标志物CysC、NGAL、KIM-1、IL-18及其组合的检验效能。 3.药物性肾损伤生物标志物联合检测组合 比较拟推荐的生物标志物联合检测组合在化学药物和中药的肾损伤模型中变化的共同特点，探讨其对药物性肾损伤评价的价值。 结果： 1.多生物标志物联合检测组合的建立 1.1.阿霉素肾损伤模型中各标志物的变化及效能 CysC在给药首日即显著性升高，远早于病理损伤出现且持续始终，逐渐增多的蛋白管型和肾小球结构异常的病理观察证实其生物学意义。 uTP、uALB第8天起显著性升高，提示肾小球滤过功能障碍。 uNGAL、KIM-1和IL-18在第12天显著性升高，说明后期肾小管的病变损伤。 BUN在各时间点均没有显著性升高，CR至第28天才显著性升高。 ROC曲线分析：BUN和CR的曲线面积均小于0.5。CysC曲线面积0.875，表现出较高的敏感性和特异性。NGAL、uTP和uALB也显示一定的检验效能。组合高效标志物uTP+uALB、CysC+NGAL和uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)，其中CysC+NGAL曲线面积0.890，远大于BUN和CR，亦超过单一标志物。 1.2.庆大霉素肾损伤模型中各标志物的变化及效能 uTP、uNGAL、KIM-1和IL-18在给药首日即显著性升高，且贯穿始终，预示了肾小管部位的损伤及其发展状态，与病理观察一致。 BUN和CR第6天起有显著性升高，同步于病理损伤。 ROC曲线分析：uTP曲线面积0.884，表现出较高的敏感性和特异性。BUN和CR显示出一定的检验效能，与之相比，CysC、NGAL、uNGAL、KIM-1和IL-18的检验水平优于两者，其中后三者具有极高的敏感性。组合高效标志物CysC+NGAL和uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)，其中uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)曲线面积0.804，高于BUN、CR和单一标志物。 1.3.顺铂肾损伤模型中各标志物的变化及效能 uNGAL、KIM-1和IL-18在给药第2天均有显著性升高(uNGAL于首日)，早于损伤出现且恢复期无逆转。CysC第3天起亦显著性升高至第8天。蛋白管型增多、基底膜增厚的肾小球病变和不可逆的肾小管嗜碱性损伤表现印证其变化意义。 uALB第3天显著性升高，BUN、CR第6天起显著性升高，说明肾小球滤过率降低。 ROC曲线分析：CysC曲线面积0.829，表现出较高的敏感性和特异性。BUN和CR显示出一定的检验效能，而uNGAL、KIM-1和IL-18的曲线面积均超过两者，且具有较高的敏感性。组合高效标志物CysC+NGAL和uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)，曲线面积分别为0.839和0.823，高于BUN、CR和单一标志物。 1.4.综合分析 与组合内相应的单一标志物相比，不同联合检测组合的曲线面积均有不同程度的增加。同时各标志物组合的检验效能远远高于BUN和CR，亦优于BUN+CR的组合。其中血清CysC+NGAL和尿液uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)的组合对三种药物引起的肾损伤均表现出较高的检验价值。 2.多生物标志物联合检测组合评价中药肾毒性 2.1.马兜铃酸类药物引起的肾损伤中各标志物的变化及效能 马兜铃酸引起的肾损伤：BUN和CR在第15天显著性升高，uALB前10天明显升高，停药后均恢复，提示肾小球滤过受损。 关木通引起的肾损伤：BUN在第24天显著性升高。CR第15天起显著性升高持续至停药，反映肾小球滤过率下降。 血清NGAL在第7天显著性升高，稍早于CysC。尿液uNGAL和IL-18在第3天显著性升高，KIM-1至第10天显著性升高。近端小管上皮细胞的损伤部位以及不可逆的肾小管坏死的病理表现揭示了标志物变化的早期性和生物学意义。 ROC曲线分析：CysC、NGAL、uNGAL、KIM-1和IL-18的检验效能均远高于BUN和CR，具有显著性差异。uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)组合的曲线面积大于0.9，CysC+NGAL组合的曲线面积高达1.0。 2.2.多次给予商陆水煎液致大、小鼠肾损伤中各标志物的变化及效能 多次给予商陆水煎液可致大、小鼠肾损伤，病理损伤以肾小管上皮细胞变性、脱落、坏死以及管腔内蛋白管型为主要表现。 BUN、CR和uTP没有显著性升高，不能在早期预测以及同步反映肾损伤的产生和状态。uALB在给药中期显著性升高，提示肾小球滤过功能受损。 血清CysC和NGAL没有明显变化。尿液uNGAL、KIM-1和IL-18在各时间点均有显著性升高，并持续至恢复期，其变化的生物学意义与病理损伤的发展状态及部位一致。 ROC曲线分析：uNGAL、KIM-1和IL-18的检验效能远远高于BUN和CR，具有显著性差异。uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)组合面积大于0.95。 3.药物性肾损伤生物标志物联合检测组合 血清CysC+NGAL和尿液uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)的组合对药物，包括中药引起的肾损伤评价均具有较高的检验水平。 结论： 1.通过对阿霉素、庆大霉素、顺铂诱导的肾损伤模型中标志物变化特征及效能的研究，提示多生物标志物联合检测能够显著提高对肾损伤的检验效能，其中血清CysC+NGAL和尿液uNGAL+(KIM-1)+(IL-18)可作为推荐组合用于药物性肾损伤的评价。 2.血清CysC+NGAL和尿液uNGAL+(KIM-l)+(IL-18)的生物标志物联合检测组合对马兜铃酸和关木通引起的马兜铃酸肾病以及商陆诱导的肾损伤均具有较高的检验水平，检验效能超过BUN和CR。 3.肾损伤标志物CysC、NGAL、KIM-1和IL-18在阿霉素、庆大霉素和顺铂诱导的肾损伤模型中表现出优于BUN和CR的检验效能。