论文部分内容阅读
研究目的:鳞状细胞癌抗原(Squamous cell carcinoma antigen,SCCA)是一种抑制型丝氨酸蛋白酶抑制剂,生理性表达于鳞状上皮组织。其有两个亚型,SCCA1、SCCA2,基因核酸序列98%同源,蛋白氨基酸序列92%一致,但在功能上有较大差异。早期的研究显示,SCCA的表达水平或与鳞状细胞癌的发生、进展相关,近年来国内外的研究发现,SCCA在不同程度的肝病如肝癌、慢乙肝、肝硬化等组织中亦有不同表达,SCCA在肝癌组织中的表达水平高于其他肝病组织。本文旨在从蛋白水平检测SCCA1在各类肝病患者中的表达情况,明确SCCA1在慢乙肝患者、肝硬化及肝癌中的表达水平,探讨SCCA1在肝癌组织中的表达水平与患者临床病理学相关因素的关系及其在肝癌患者预后评估中的价值。细胞学实验进一步检测SCCA1在正常肝细胞系及肝癌细胞系中表达情况及其在细胞中的定位。研究方法:采用Western blot方法检测A组56例肝组织标本SCCA1表达情况,包括肝癌(n=28)和癌旁(n=28)。采用免疫组化方法检测B组244例组织标本SCCA1蛋白的表达情况,包括肝癌(n=103)、癌旁(n=89)、慢性肝病(慢性乙型病毒性肝炎或肝硬化)(n=23)、高/低级别不典型增生(n=19)、壶腹周围癌(n=6)、正常肝组织(n=4)。ELISA方法检测68例肝病患者血清标本SCCA1浓度,包括肝癌(n=30)、肝硬化(n=18)、慢乙肝(n=20)和健康对照组(n=20)。免疫荧光分析SCCA1在正常肝细胞系(HL-7702)及肝癌细胞系(HepG2)中表达情况及其在细胞中的定位。统计分析SCCA1在各组织中的表达特点,分析SCCA1的表达与肝癌病理分级、肿瘤大小、TNM分期等临床病理学特征的相关关系,并通过生存分析探讨SCCA1的表达水平与肝癌患者预后的关系。研究结果:Western blot结果显示:SCCA1在肝癌组织、癌旁组织中均有表达,在肝癌中的表达水平高于癌旁,差异有统计学意义(P<0.001)。免疫组织化学结果显示:103例肝癌组织中有76例、19例不典型增生中有13例、89例癌旁组织中有36例、23例慢性肝病组织中9例表达SCCA1,6例壶腹周围癌组织中4例表达SCCA1,而4例正常肝组织未见SCCA1表达。分析比较各组间SCCA1表达阳性率,SCCA1的阳性率从正常肝、慢性肝病、癌旁组织、不典型增生到肝癌组织呈逐渐升高趋势(P<0.05)。结合临床病理学相关因素分析显示,SCCA1在肝癌中的表达与肿瘤的分化程度相关,肝癌患者SCCA1表达率在低分化组中的表达率低于高、中分化组,差异有统计学意义(P=0.043),且其与患者肝功能Child-Pugh相关(P=0.021)。生存分析显示SCCA1阴性组较阳性组长期生存期有下降趋势,差异有统计学意义(P=0.029)。在肝癌组织高、中分化组中,SCCA1的表达与患者整体生存期的增加相关(P=0.016),在低分化组中亦有相同的结论(P=0.027)。多因素生存分析显示,SCCA1的阳性表达是肝癌患者整体生存独立影响因素[hazard ratio=3.757,P<0.001]。ELISA结果显示肝病患者血清中SCCA1表达水平均较低,其表达均值在慢乙肝患者中和肝硬化患者中均低于肝癌患者,但差异均无统计学意义(P>0.5),血清学检测结果显示慢乙肝患者SCCA1表达水平高于肝硬化患者(P<0.05)。SCCA1在健康对照组、慢乙肝/肝硬化、肝癌患者中的表达趋势与组织检测结果一致。免疫荧光实验结果显示SCCA1在正常肝细胞系及肝癌细胞系中均有表达,其主要定位在细胞核中,这与免疫组织化学染色结果相一致。研究结论:SCCA1在慢乙肝组织、癌旁肝组织、不典型增生组织及肝癌组织中的表达水平呈逐渐增高趋势,SCCA1在正常肝组织中不表达,提示SCCA1可能与肝癌的发生进展相关。进一步分析表明,SCCA1的表达与肝癌组织的分化程度及患者肝癌患者预后生存相关。但在慢乙肝、肝硬化及肝癌患者血清中SCCA1的表达水平较低,可能与其是非分泌蛋白相关,或与试剂盒抗体的敏感性相关。