【摘 要】
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芽孢杆菌被认为是一种能有效抑制植物病原真菌并促进植物生长发育作用的生防细菌,在果蔬采后病害防治方面具有巨大的应用潜力。解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）LY-1菌株是从龙眼叶片筛选分离得到一株对多种植物病原真菌具有强烈抑制作用的拮抗细菌。本研究在前人的工作基础上,对Bacillus amyloliquefaciens LY-1菌株分泌产生的脂肽类抑菌物质进行深入
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芽孢杆菌被认为是一种能有效抑制植物病原真菌并促进植物生长发育作用的生防细菌,在果蔬采后病害防治方面具有巨大的应用潜力。解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）LY-1菌株是从龙眼叶片筛选分离得到一株对多种植物病原真菌具有强烈抑制作用的拮抗细菌。本研究在前人的工作基础上,对Bacillus amyloliquefaciens LY-1菌株分泌产生的脂肽类抑菌物质进行深入研究,建立了抗菌脂肽的分离纯化方法,并对抗菌脂肽的化学结构、理化特性以及抑菌机理进行研究。主要的研究结果与结论如下:（1）Bacillus amyloliquefaciens LY-1菌株产生的脂肽类抑菌物质分离纯化和结构鉴定方法的建立。Bacillus amyloliquefaciens LY-1菌株的发酵上清液分别经盐酸沉淀和甲醇抽提制备得到脂肽粗提物,然后将脂肽粗提物经RP-C18柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、正相硅胶柱层析等柱层析方法进行纯化,最终获得化合物J。试验采用Q-TOF-MS质谱和核磁共振1H-NMR谱对化合物J的化学结构进行分析和鉴定,结果表明化合物J的分子量为1042.5 Da和1056.5 Da,推断Bacillusamyloliquefaciens LY-1菌株产生的化合物J是由脂肽Iturin家族中一对同系物 IturinA2和IturinA4组成。（2）Bacillus amyloliquefaciens LY-1菌株抗菌脂肽IturinA抑菌谱和理化特性的研究。植物病原真菌的抑菌试验结果表明,Bacillus amyloliquefaciens LY-1菌株产生的脂肽IturinA对植物病原真菌具有广谱的抑制效果,对枇杷炭疽病菌、枇杷拟盘多毛孢、枇杷镰刀菌、枇杷焦腐病菌、龙眼可可毛色二孢、龙眼拟茎点霉、橄榄小孢拟盘多毛孢、橄榄葡萄座腔菌均具有强烈的抑制作用。另外,试验研究了脂肽IturinA对温度、pH、紫外照射和蛋白酶水解的稳定性。结果表明,脂肽IturinA具有良好的稳定性,对热和酸碱稳定,且具有一定的抗紫外照射和抗蛋白酶水解的能力,表明其在生物防治方面有巨大的应用潜力。（3）Bacillus amyloliquefaciens LY-1菌株产生的脂肽IturinA对橄榄小孢拟盘多毛孢抑菌机理的研究。抑菌试验结果表明:脂肽IturinA对橄榄小孢拟盘多毛孢的MIC值为15.63 μg/mL和MLC值为62.5 μg/mL;脂肽IturinA对橄榄小孢拟盘多毛孢的菌丝生长,产孢能力和孢子萌发均具有显著的抑制作用。另外,从细胞水平研究其抑菌机理,研究结果表明:经脂肽IturinA处理的橄榄小孢拟盘多毛孢细胞膜透性发生改变,引起细胞内蛋白质和核酸物质泄露,菌丝丙二醛含量升高。因此认为,脂肽IturinA会使橄榄小孢拟盘多毛孢细胞膜发生膜脂过氧化作用,破坏细胞膜结构,改变细胞膜膜透性,从而导致细胞生长受抑制或死亡。橄榄果实生防试验结果进一步表明,脂肽IturinA可以保护橄榄果实抵御橄榄小孢拟盘多毛孢的侵染,提高果实抗病性。
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