何首乌来源于蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根。生首乌性平,味苦涩,微甘,具有解毒,消痈,润肠通便的功能,临床用于瘰疬疮痈,风疹瘙痒,肠燥便秘;制首乌性变温,味转甘,入肝肾经,具有补肝肾,益精血,乌须发,强筋骨的功能,用于血虚萎黄,眩晕耳鸣,须发早白,腰膝酸软,肢体麻木,崩漏带下,久疟体虚;高血脂症。临床常用其制品,生品少用。 中药炮生为熟引起的药性改变与其内在物质基础的变化有关。内在物质基础的变化包括量变和质变,单纯一种成分的变化并不能全面解释整个单味中药饮片功效的改变,而中药何首乌中具有补肝作用的二苯乙烯苷,在炮制后含量降低,因此,仅以单一的成分指标来控制中药饮片的质量是不够的,必须全面考察何首乌中各类成分在炮制过程中的变化情况及其变化规律,尤其应注意炮制前后发生了何种质变。指纹图谱技术在中药领域的应用,为中药饮片的质量评价,炮制工艺的筛选,优化以及炮制原理的探讨提供了新的方法。通过对炮制前后色谱指纹峰相对峰面积的比较,可以反映成分组成的量变,而制品中旧的色谱峰的消失及新的色谱峰的产生,又可以显示炮制引起的质变。 本课题以何首乌为对象,测定了不同炮制程度的清蒸何首乌、加压清蒸何首乌、加压黑豆汁蒸何首乌中蒽醌类、二苯乙烯苷类、还原糖类成分的含量,分析探讨了各种不同炮制程度制首乌中三类成分含量的变化规律,应用指纹图谱技术,找出了何首乌炮制前后高效液相图谱变化特征峰,比较何首乌常压蒸与加压蒸、清蒸与加辅料蒸之间的差异。该研究结果为筛选何首乌的炮制工艺、确定药性改变的最佳炮制程度及其探讨何首乌炮制原理提供了科学依据。研究内容及结果如下: ⑴通过对文献的分析整理,选择何首乌清蒸和黑豆汁蒸两种蒸制方法、常压蒸和加压蒸两种加热方式作为炮制工艺考察对象。以蒽醌含量为指标,筛选了何首乌炮制流程。比较了不同水处理方式、切制先后对制首乌的影响,筛选出先切制后蒸制,减少中间一部分水处理过程来进行何首乌炮制。按此流程,制备了不同加热时间的加压清蒸、加压黑豆汁蒸和常压清蒸的制首乌作为研究对象,供进一步研究使用。 ⑵采用高效液相法测定不同炮制程度的常压清蒸、加压清蒸和加压黑豆汁蒸制首乌的二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量,采用分光光度法测定还原糖的含量,并分析了各种制首乌中不同成分随蒸制时间变化的规律。结果显示:制首乌中各成分随蒸制时间的延长,均呈现规律性的变化,二苯乙烯苷在加压清蒸0.5-1hr,有短暂的升高,但随之立即降低,在加压清蒸 4-6hr 内改变幅度极小,约为 7%;游离蒽醌类成分随炮制时间延长逐渐升高,在 4hr 之后不再升高,维持较长时间的平衡状态;结合蒽醌类随加压时间延长,但在 4hr 也不再降低,维持较长时间的平衡;还原糖的含量随炮制时间延长不断升高,但 4hr 后也不再升高,维持较长时间段内的平衡。研究结果提示:何首乌的炮制原理跟其结合蒽醌的降低,游离蒽醌的升高,二苯乙烯苷含量的维持,还原糖含量的升高有着密切的关系。各类成分达到平衡的何首乌炮制程度有可能与生制品的药性改变有直接关系。 ⑶比较常压与加压,加黑豆汁与不加黑豆汁制品各成分变化规律,就二苯乙烯苷、蒽醌类、以及还原糖类成分而言,加压清蒸 4hr 制品与常压清蒸 32hr 三<WP=5>IV 何首乌炮制程度与内在质量相关性的研究成分含量相近,加压黑豆汁蒸与加压清蒸制品无显著差异,这也验证了一些学者在常压清蒸和常压黑豆汁蒸法何首乌饮片质量比较的结果。(4)建立何首乌的 HPLC 指纹图谱条件,对何首乌各制品进行分析,对加压清蒸何首乌进行定性和定量研究。寻找炮制前后的变化特征峰,找出各峰变化规律与这种规律之间的相关性。比较加黑豆汁与否、加压与否对制首乌指纹图谱各峰的影响。结果表明:何首乌炮制前后出现了一些新峰(峰 8、9、14、7、6、17),也失去了一些旧峰(峰 11)。有些峰峰面积明显增加(峰 2、3、8、9),也有些峰峰面积明显降低(峰 4),还有些峰其面积的改变呈先升高后降低至一定水平的趋势(峰 5、6、7)。黑豆汁蒸与清蒸相比,无新峰产生,但是有个别峰的改变规律有所不同;加压与常压相比,有新峰产生,且各峰的改变规律不同。(5)收集了来自全国四个省市的 13 批市售制首乌,对其进行传统质量考察,并运用 HPLC 指纹图谱对其进行分析,发现外观性状与其内在质量之间存在一些关联性和局限性,指出传统质量鉴别必须结合现代化学分析手段进行。这 13 批市售制首乌与本实验所制首乌共同具有一些特征峰,指纹图谱分析结果表明市售制首乌三类成分含量参差不齐,作为活性成分的二苯乙烯苷类、大黄素、大黄素甲醚在其中 4 批市售制首乌中均未检出或含量过低。初步推测可能是由于炮制太过或者原药材质量不合格引起。(6)综合各成分含量测定以及指纹图谱分析结果,我们发现,何首乌在加压 0.5 小时和 4 小时各成分改变比较明显,在 4 小时之后,何首乌各成分含量及部分特征峰的比例趋于稳定。文献资料表明,何首乌的炮制原理不仅仅体现在增效上,还体现在减轻毒副作用,主要指对胃肠道的刺激