生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45(growth arrest and DNA damage inducible protein 45,GADD45)家族基因是DNA损伤修复的重要基因。GADD45家族共编码3种蛋白(GADD45A、GADD45B以及GADD45G),它们都主要是与多种细胞周期相关蛋白相互作用的核蛋白,具有非常相似的氨基酸序列,蛋白同源性为55%~58%。近年来,随着科研人员对GADD45G基因的不断探究,一些高通量数据表明GADD45G基因与唇腭部发育密切相关,但目前尚没有任何模型可以证实该基因与唇腭部的直接关系,且机制尚不明确。因此,建立一个更好的GADD45G基因突变的动物模型、探究该基因与唇腭部的关系迫在眉睫。目前,小鼠与兔子等动物疾病模型已被广泛应用于探究人类唇腭裂发病机理的研究。然而,由于小鼠与人类机体在生理特性和基因同源性等方面存在差异,有时并不能完全模拟人类的疾病特征。而兔作为一种探究唇腭部发育的动物模型,其与鼠相比具有与人类更为相似的生理学和遗传学等特点。目前,CRISPR/Cas9基因编辑技术已成为主流的基因编辑工具,该技术具有设计简单,使用方便等优点,并成功应用于鼠,猪,斑马鱼等动物的基因组编辑。2016年David团队率先开发完成了从C到T,G到A两种转换的单碱基基因编辑技术,该技术的应用可以更好的模拟人类疾病,并且有这广阔的基因治疗前景。尽管GADD45G突变小鼠模型已报道,但没有发现唇腭裂的现像。因此,实验应用兔子作为疾病动物模型探究GADD45G基因与唇腭部发育是否有密切联系。本实验应用两种基因编辑技术构建GADD45G基因打靶载体,通过显微注射法获得GADD45G基因突变兔。研究结果表明,GADD45G基因突变兔展现出唇裂的临床症状,并且由于吃奶问题三日内全部死亡。通过对胚胎时期13天的小兔进行唇部检测,发现唇部发育时期细胞的增殖、凋亡和上皮-间充质转化紊乱。综上所述,本研究利用CRISPR技术,成功构建了GADD45G基因突变兔,其可作为探究GADD45G与唇腭裂发育联系的疾病动物模型。