两个bHLH同源基因分别负调控ABA依赖的拟南芥和大豆干旱胁迫应答

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ABA(abscisic acid)可参与植物对干旱、高盐和寒冷等环境胁迫的响应,该响应常受到转录因子的精准调控。bHLH转录因子参与的ABA介导的植物干旱应答鲜有报道,在大豆中更是寥寥无几。本研究前期筛选到—个干旱相关的大豆转录因子GmbHLH120,并鉴定到其在拟南芥中的同源转录因子AtbHLH018。本文以拟南芥AtbHLH018转录因子研究为先导,通过一系列的表型观察及功能分析研究,最终证明这两个转录因子均参与ABA依赖的植物干旱响应过程。具体结果如下:1)拟南芥AtbHLH018和大豆GmbHLH120是彼此亲缘关系最近的同源基因。二者均具有典型bHLH结构域中的保守氨基酸;二者蛋白序列相似度达38.9%,同时二者所在的进化枝来源于同—个节点。表明两个典型的bHLH基因在拟南芥和大豆中同源性最高。2)拟南芥AtbHLH018基因可以通过ABA依赖的气孔关闭,负调控植物耐旱。实验结果表明:AtbHLH018基因的表达在外源PEG和ABA处理后均被抑制;AtbHLH018基因功能缺失突变体对PEG敏感性显著减弱,离体叶片失水速率减慢,气孔孔径比显著减小;双荧光素酶报告系统证明AtbHLH018具有转录激活活性;atbhlh018突变体种子萌发及幼苗生长均对ABA敏感。3)大豆GmbHLH120基因也可以通过ABA依赖的气孔关闭,负调控植物干旱胁迫应答。实验结果表明:利用CRISPR:Cas9基因编辑系统和大豆遗传转化体系,获得了GmbHLH120的转基因敲除植株,通过筛选获得两个gmbhlh120纯合突变体株系;gmbhlh120功能缺失突变体的离体叶片失水速率减慢,气孔孔径比显著减小,同时GmbHLH120基因过表达的毛状根对PEG处理的敏感性显著增强;而GmbHLH120基因过表达的毛状根对ABA的敏感性显著减弱。上述结果表明,两个同源基因AtbHLH018和GmbHLH120均以负调控的方式分别参与拟南芥和大豆对干旱胁迫的响应,且该响应均与ABA依赖的气孔关闭相关。这为进一步阐明bHLH基因调控植物干旱胁迫响应的分子机制,提供了必要的研究基础。
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