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副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性海洋细菌,广泛存在于海洋制品以及高含盐腌制品中,如果人们吃了被副溶血性弧菌污染的食物,会引起腹痛、呕吐,严重者会脱水,甚至死亡。因此,建立一种对副溶血性弧菌简单、快速、准确的检测方法已成为临床诊断的迫切需要。为了改变传统方法以及PCR技术对副溶血性弧菌检测所带来的不利,在本文中研究了依赖于解旋酶的等温核酸扩增方法(HDA)和变性泡介导的链交换引发的等温核酸检测方法(SEA)这两种等温核酸扩增反应。首先,研究了一种依赖于解旋酶的等温核酸扩增方法(HDA),但是在HDA反应中需要一种昂贵的耐热解链酶,因此在很大程度上限制了该技术的推广应用,本研究中为了降低HDA的反应成本,尝试表达纯化这种耐热解旋酶,但纯化表达后的解旋酶经实验验证并无活性,故使用NEB公司试剂盒(IsoAmp IIUniversal tHDA kits)进行反应,该方法成功地检测了副溶血性弧菌,既能避免检测其他致病菌又能在复杂体系中将副溶血性弧菌检测出来,并且该方法能在荧光定量PCR仪中20 min内即可完成检测,在普通水浴锅中60 min也可完成检测。但该方法不足之处在于检测限稍高,无法满足低浓度靶标的检测,通过在体系中加入PEG-200和ET SSB这些解链剂以此来提高检测限,但并无促进作用。为弥补HDA方法不足之处,本研究又通过一种等温核酸方法,即变性泡介导的链交换引发的等温核酸检测方法(SEA),这种方法基于DNA自身变性泡的呼吸,使DNA双链达到动态解离状态的等温核酸方法,该反应仅需一种DNA聚合酶参与就可完成反应。但原有实验体系检测限高,故在原有实验体系基础条件的优化下,该方法可检测1.0×10~-1313 M的副溶血性弧菌基因组DNA,且特异性和抗干扰能力强,与其他传统方法相比,该反应在20-40 min内即可完成检测。SEA方法可直接对副溶血性弧菌的菌液进行检测,避免了提取基因组DNA的繁琐步骤以及对实验人员操作技术上的要求,大大缩短了实验检测的时间,实现了快速检测的要求,并且通过在SEA反应中加入一种染料,实现了对副溶血性弧菌菌液的可视化检测,摆脱对传统核酸检测技术需要依赖复杂的荧光光电转换仪器或昂贵检测设备的缺点,仅仅需要一个简单的保温杯或金属浴即可实现检测。最后,利用SEA技术对副溶血性弧菌模拟了实际样品进行了检测,能成功的在实际样品中检测出来。本章优化之后的SEA技术,在即时检测、动物疫病监测以及环境监测方面都有着至关重要的作用,满足现场快速检测的需求。