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乳酸脱氢酶(LDH，EC1.1.1.27)广泛存在于动植物及微生物体内，是生物体内进行糖代谢的重要酶之一，主要催化丙酮酸和乳酸之间的可逆转化。该酶在动物体内主要存在H、M、C三种亚基，H、M两个亚基组成了LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)五种同工酶，LDH-C4是由C亚基构成的四聚体。 乳酸脱氢酶是常用的临床诊断用酶，主要用于心肌梗死、肝病、肺梗塞及白血病的诊断，丙酮酸盐的检定，盐渍品、发酵奶制品及饮料生产中的食品添加剂，是生产丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒的主要原料。目前已有较多关于乳酸脱氢酶的研究报道，但鸭肝中乳酸脱氢酶分离纯化的研究未见报道。因此，本文以来源较广，价格便宜，取材方便的鸭肝为实验材料来分离纯化乳酸脱氢酶，并对其部分酶学性质进行研究，旨在为该酶的更深入研究及工业化生产提供参考。研究结果如下: 1.鸭肝乳酸脱氢酶的分离纯化 新鲜的鸭肝，经匀浆、PBS缓冲液抽提、乙醇和硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析后，获得电泳纯的LDH。经纯化后比活力达到668.82 U/mL，酶活性回收率为25.79％，纯化倍数为185.78倍。 2.鸭肝乳酸脱氢酶的性质研究 鸭肝乳酸脱氢酶全分子质量约为170.93 kD，亚基分子质量为44.72 kD;最适反应温度为45℃，最适pH值为7.4，在25～45℃及pH5～10的范围内稳定性较好;在45℃，pH7.4条件下，测得该酶对底物NADH的Km值为3.407μmol/L，对丙酮酸钠的Km值为8.431μmol/L。 Cu2+、Ag+、氯仿、甲醇、异丙醇、乙醇、草酸、SDS、EDTA对鸭肝LDH都有较明显的抑制作用，Co2+、K+对鸭肝LDH有双重作用，低浓度激活而高浓度对酶活性有抑制作用。 3.鸭肝乳酸脱氢酶功能基团的研究 本实验通过用不同化学修饰剂对鸭肝乳酸脱氢酶的修饰结果表明:丝氨酸残基、半胱氨酸的巯基、色氨酸残基和甲硫氨酸的硫醚基是鸭肝乳酸脱氢酶活性中心的必须基团，参与了该酶活性中心的构成;组氨酸的咪唑基、精氨酸残基、酪氨酸的酚羟基、二硫键、赖氨酸残基与鸭肝乳酸脱氢酶活性中心没直接关系，因此，不是鸭肝LDH活性中心的必须基团。