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目的构建HIF-1α（Hypoxia inducible factor1α,（?）氧诱导因子-1α）的慢病毒载体（Lenti-HIF-lα）,转染骨髓基质干细胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs）后,检测HIF-1α在BMSCs内的不同时间点的表达及其位置的鉴定。方法根据野生型人源的HIF.1α基因（NM001530）序列设计引物及序列片段的PCR扩增,将目的基因PCR产物连接到载体pEGFP-N1上,构建真核表达载体pEGFP-N1-HIF-1α,挑选阳性克隆进行测序鉴定,然后将目的基因PCR产物和目的载体pEGFP-N1用NheI和BamHI分别进行酶切,经凝胶电泳进行pEGFP-N1-HIF-1α重组载体菌落PCR鉴定,鉴定重组质粒中的HIF-1α目的基因。采用LR重组系统将目的序列重组到慢病毒载体plenti6.3V5-DEST上,构建慢病毒载体Lenti.HIF-1α（Lenti-LacZ为对照组）。取细胞状态良好,处于对数生长期的293T细胞,用构建的慢病毒表达载体pEGFP-N1-HIF-1α-IRES-GRP及包装质转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,荧光显微镜下观察荧光细胞数量,进行病毒滴度测定。Lenti-HIF.1α和Lenti-LacZ分别转染BMSCs,在转染0,1,4,7,14,以及21d提取RNA,经qPCR测定HIF-1α的mRNA表达水平。转染BMSCs成功后对细胞进行免疫荧光染色,4%多聚甲醛固定,PBS洗涤,在封闭液中封闭30min,依次加入一抗、二抗,加入核染色剂,PBS洗涤,封片后共聚焦显微镜下观察HIF.1α在BMSCs内的位置。结果通过对构建质粒克隆进行测序及比对,该序列与GenBank中序列相同,证实真核表达载体pEGFP-N1-HIF-1α的构建成功。通过对重组载体菌落进行酶切,证明重组质粒中已经克隆入HIF-1α目的基因。把Lenti-HIF-1α转染BMSCs细胞0,1,4,7,14和21d后qPCR检测结果表明HIF.1α在转染后的第4d,倒置荧光显微镜观察开始有明显的过表达,14d后（?）nRNA的表达水平达到了峰值,直到21d都维持在很高的水平。免疫组化结果显示HIF.1α的免疫荧光染色与细胞核的DAPI染色完全重合,证明转染的目的基因位于BMSCs核内。结论成功构建了重组慢病毒载体Lenti.HIF.1α,培养大鼠BMSCs后转染Lenti.HIF-1α,转染的目的基因位于BMSCs细胞核内,为HIF.1α介导的BMSCs行骨缺损修复实验研究奠定了基础。