SIK1对肝癌细胞增殖、凋亡与迁移的影响

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【目的】  1. 检测SIK1在肝癌细胞系中的表达情况。  2. 探讨SIK1对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。  【方法】  1. 免疫印迹实验检测肝癌细胞株MHCC97-L、HEP3B中SIK1的表达情况。  2. 将SIK1基因的慢病毒载体转染肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞株构建SIK1敲低组,空载体被用作阴性对照组,通过实时定量PCR检测SIK1的表达情况。  3. 噻唑蓝比色(MTT)法检测SIK1在1、2、3、4、5 d时对细胞增殖的影响并绘制生长曲线。  4. 使用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。  5. 划痕愈合实验检测6、24、48 h时细胞的迁移能力。  【结果】  1.免疫印迹实验:SIK1在肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞中的相对表达明显低于正常肝脏细胞( P<0.001)。  2. 实时定量PCR检测:慢病毒介导SIK1基因沉默后肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞株SIK1相对表达均明显低于对照组( P<0.001)。  3. 敲低SIK1后,肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞增殖能力均显著增加( P<0.05)。  4. 敲低SIK1后,肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞的凋亡率明显下降( P<0.01)。  5. 通过与对照组相比,敲低SIK1 以后,G1期细胞比例显著降低,而S期和G2期的细胞比例明显上升( P<0.05)。  6. 划痕愈合实验:敲低SIK1后,MHCC97-L和HEP3B细胞在24 h和48 h时的迁移距离明显大于对照组( P<0.01)。  【结论】  1. SIK1在肝癌细胞中显著低表达。  2. SIK1可以抑制肝癌细胞增殖和迁移能力,同时增高凋亡率。
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