植物过氧化物酶的功能多样,在植物的生长过程中发挥着重要的作用,目前采用转基因技术研究植物过氧化物酶功能是较为热门的课题,一方面更深入的了解了目的基因的功能,另一方面也为目的基因的工业化应用提供了理论依据。本实验选用已经成功构建转萝卜过氧化物酶基因RsPrxl的酵母菌株(GSRP25)为研究对象,在本实验室前期的研究基础上,进一步对转基因酵母培养基优化,即在培养基中添加血红素0.5g/L,当培养时间到达80h左右时向培养基中加入0.5ml/L微量元素混合物(0.5g/L MgCl2、30g/LFeCl2·6H2O、1g/L ZnCl2·4H2O、0.2g/L,CoCl2·6H2O、1g/L Na2MoO4·2H2O、0.5g/LCaCl2·2H2O、1g/L CuCl2和0.2g/L H2BO3),在经过优化后的培养基培养下GSRP25的最大分泌过氧化物酶酶活达到30.9U/ml,是优化前培养基所获得酶活量的5.92倍,经SDS-PAGE电泳检测出目的条带的表达量也相对显著增强。　　 其次,对转基因酵母GSRP25进行抗性方面的研究,本实验选择诱导(BMMY培养基培养)-不诱导(YPD培养基培养)和不诱导(YPD培养基培养)-诱导(BMMY培养基培养)两种培养条件,观察NaCl、H2O2、温度等变化时,GSRP25的抗性变化。实验结果表明:诱导—不诱导培养条件下转萝卜过氧化物酶RsPrxl酵母的抗盐、抗氧化及抗高温和低温功能高于不诱导—诱导培养条件。其中,抗盐和抗高温功能最强。因此,不仅证明了诱导—不诱导培养条件是研究外源基因功能的最佳培养条件,而且揭示了外源萝卜过氧化物酶RsPrxl作为植物体内的保护酶体系,具有抗盐、抗氧化以及抗高温的作用。　　 高盐环境一直是人们关注的重要的胁迫因子之一,对酵母开展盐胁迫机理研究也是生物学研究的热点之一。但目前对酿酒酵母胁迫机制已经有了较为深入的了解,而对巴斯德毕赤酵母的相关研究报道甚少,本实验以转萝卜过氧化物酶基因RsPrxl毕赤酵母GSRP25为研究对象,对其进行抗盐方面的深入研究。从菌液浓度(OD600)、POD酶活和可溶性蛋白含量等生理生化指标可以看出转基因酵母GSRP25的抗盐胁迫能力要强于野生型的毕赤酵母GS115。从代谢机理分析,高盐胁迫会对酵母细胞产生两方面的毒害,一是Na+离子毒害,二是渗透压胁迫,为进一步研究其作用机制,本实验选择不同盐浓度、不同处理时间作用于两种菌株,并提取酵母总RNA,采用半定量RT-PCR的方法进行抗性基因表达鉴定,结果证明:抗性基因HSP12、ALD3在两种菌株中都有不同程度的表达,但在GSRP25中的表达量都要高于GS115,说明RsPrxl在酵母中不仅起到了保护酵母抗盐胁迫的作用,还能够在一定程度上对酵母自身抗性基因进行转录水平调控,增加它们的表达量,提高酵母的抗盐胁迫能力。　　 综上所述,本课题不仅通过优化培养基提高了RsPrxl基因的表达量,更重要的是证明了RsPrxl基因具有抗盐、抗氧化、抗高温的作用,以及提高酵母抗性的明显效应。