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在农业生产过程中,干旱一直是威胁农作物生长、影响粮食产量的重要自然灾害,因此培育耐干旱的作物品种是一条有效的应付途径。在植物基因工程领域,高等植物功能基因的转录翻译特点与其调控机制一直是比较热门的研究方向。其中,由于启动子所具有的独特的结构与功能特点,能够调控高等植物基因的表达时间、表达位置、表达产物量,为利用转基因工程手段培育具有特殊功能的作物提供了全新的视野,具有较大的潜力。启动子分为组织特异型启动子、组成型启动子和诱导型启动子。鉴于组成型启动子驱动外源基因表达不具备时间和组织特异性,往往使植物体内积累过量外源基因表达产物,导致植物表型、代谢受到严重影响。因此对特异性启动子和诱导型启动子的研究更具有价值。拟南芥是植物科学领域特别是植物转基因工程领域中重要的模式植物。拟南芥MYB基因家族是典型的具有抗逆功能的基因家族,本研究以拟南芥为实验材料,选择MYB35基因的启动子,命名为Atpmyb35,对其进行结构及功能预测,通过特异引物克隆该启动子序列,构建真核表达载体,GUS染色分析,农杆菌介导侵染烟草等一系列的研究,明确该启动子的功能,为以后培育抗旱作物新品种提供依据。本研究结果如下:1.从拟南芥在线数据库(TAIR)获得了启动子Atpmyb35序列,对启动子Atpmyb35序列进行生物信息学分析,分析结果表明序列中含有多种高等植物启动子通用的顺势作用元件,如TATA-BOX、CAAT-BOX,是真核植物启动子具有特征元件。同时又发现了参与ABA响应的原件、参与干旱诱导反应的MYB结合位点、参与各种胁迫响应的原件、参与茉莉酸甲酯响应的原件等,功能预测结果表明该启动子受干旱逆境诱导。2.通过设计特异引物克隆启动子Atpmyb35序列,利用酶切、PCR实验验证,菌液测序结果表明成果获得启动子序列。利用真核表达载体与目的启动子片段重组,构建了真核植物表达载体pCAM∷Atpmyb35,通过农杆菌介导侵染烟草叶片及愈伤组织。观察该启动子下游的GUS基因手机发的表达情况,通过对比野生型、PEG6000处理组,未处理组,结果显示启动子具有活性,并在受到干旱诱导后活性明显增强。3.设计了渐变缺失引物,通过对启动子5,端的缺失分析,明确该启动子的组织表达方式和主要调控区域。用启动子片段与真核表达载体连接,产物命名为pCAM-Atmyb35I、pCAM-Atmyb35II、pCAM-Atmyb35III、pCAM-Atmyb35IV、pCAM-Atmyb35V。荧光定量检测结果显示,启动子的核心区域位于Atmyb35V段。活性最强的为Atmyb35I段。4.本实验利用农杆菌介导的叶盘转化法成功获得转基因烟草,通过GUS组织化学染色的方法分析了GUS基因的表达情况,结果表明启动子片段成功转入烟草并表达。经过干旱胁迫处理的转基因烟草的启动子Atmyb35活性较未处理的启动子有明显的提升。