犬细小病毒(Canine Parvovirus, CPV)属细小病毒科细小病毒属成员,可引起犬科等动物急性出血性肠炎、心肌炎、呕吐、厌食等全身性感染症状,最终导致动物死亡的一种急性、烈性传染病.近年来,由于CPV迅速传播和基因突变,导致病毒产生较强的致病力和抗原漂移现象,目前已经演变出CPV-2、CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c、NewCPV-2a和NewCPV-2b等多种亚型.细小病毒宿主范围也在不断扩大更新,目前在世界范围内已成为猫科、犬科、经济动物和珍稀野生动物的主要病原之一.猫感染CPV后会导致幼猫出现腹泻等类似犬细小病毒肠炎的症状,还会使猫成为病毒传播的中间宿主,危害其他动物健康.因此,分析猫源犬细小病毒的变异情况,制备针对猫源犬细小病毒的特异性治疗制剂尤为重要.
　　本实验从疑似细小病毒病猫的肛门拭子中,采集到样品,用F81细胞对病毒进行分离,使用PCR检测、免疫学实验、电镜负染观察,对病毒进行鉴定,成功分离到一株猫源犬细小病毒,命名为CN/C/JL-5.稳定传代该分离株至第五代,病变时间维持在36h左右,血凝效价为1∶256,TCID50为105.15/mL,免疫荧光鉴定结果呈阳性.使用5对犬细小病毒全长引物对病毒全长基因进行扩增,共获得全长基因4974bp.对病毒VP2基因分析,发现分离株共存在11处碱基突变、4处氨基酸变异,其中225位Thr→Ala、472Lys→Glu两处变异是CN/C/JL-5分离株独有的变异.分离株经浓缩后与氢氧化铝9∶1混合,灭活后制成抗原免疫犬,在血清抗体效价达到最高时采血.经饱和硫酸铵盐析法分离血清中的IgG,胃蛋白酶37℃酶切2h切除Fc片段,Protein-A、Protein-G柱纯化、SDS-PAGE检测F(ab)2纯度,IgG在170KD处出现目的蛋白,重链58KD、轻链27KD、F(ab)2在120KD左右出现目的蛋白,实验获得完整纯化的F(ab)2片段.F(ab)2中和效价为1∶836.通过动物实验检测F(ab)2的紧急预防效果和治疗效果.每个实验设置0.5mg/kg、1mg/kg和1.5mg/kgF(ab)2三个实验组以及对照组,对照组仅注射犬CPV抗体阴性血清.以CPVCN/C/JL-5攻毒后,对各实验组体温、体重、临床症状、粪便性状进行综合考察及评分,使用荧光定量PCR对粪便排毒量定量检测,结果显示,实验组各项数据及临床评分均低于对照组,证明制备的特异性F(ab)2片段对猫源犬细小病毒感染具有一定的紧急预防及治疗效果,能够缓解病毒带来的临床症状,减少排毒量及死亡率.
　　本实验成功分离一株猫源犬细小病毒并制备了犬源抗CPVIgGF(ab)2片段,证明其具有紧急预防与治疗效果,为猫犬细小病毒感染特异性治疗制剂的研制提供数据支持.