高稳定性荧光铜纳米簇的制备及其生化分析应用

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作为一类新型的荧光纳米材料,荧光金属纳米簇(包括金纳米簇、银纳米簇、铜纳米簇)具有生物相容性好、超小的纳米尺寸、优异的物理化学性质以及较强的发光信号等优点,已经广泛应用于生物成像、电化学发光、生物传感和细胞标记等多个领域。与金纳米簇和银纳米簇相比,合成铜纳米簇(CuNCs)的前体(铜离子)相对便宜,并且储量丰富。目前,脱氧核糖核酸(DNA)、多肽、蛋白质、小分子配体和聚合物等模板或稳定剂已经用于铜纳米簇的合成。然而,CuNCs容易发生团聚,其裸露的表面也容易被空气氧化,导致其光稳定性较差。牛血清白蛋白(BSA)分子含有28个半胱氨酸和20个酪氨酸残基,具有更强的保护和还原能力。BSA稳定的金属纳米簇中亲水性基团的裸露程度较低,具有对酸碱值不敏感的特性。鉴于BSA的优异特性,本文以BSA作为稳定剂和还原剂,制备了高稳定性的牛血清白蛋白荧光铜纳米簇(BSA-CuNCs),并以BSA-CuNCs作为荧光信号探针,构建了简便、灵敏的传感方法,用于化学和生物分子(如四环素、多巴胺和硫离子)的检测。主要研究内容如下:1.以BSA作为稳定剂,CuSO4作为铜源,采用一步还原法制备了BSA-CuNCs。利用BSA-CuNCs作为荧光探针,基于四环素(TC)对BSA-CuNCs的荧光猝灭效应,开发了一种快速、非标记型的荧光生物传感新方法用于四环素(TC)的灵敏检测。在优化条件下,该方法可以实现对TC灵敏的检测,TC的线性检测范围为5.0×10-8-4.0×10-5 mol/L,检出限(LOD)为5.0×10-99 mol/L(S/N=3)。此外,该方法已成功地应用于牛奶样品中TC含量的测定,相对标准偏差不大于3.3%,加标回收率为96.0%-102.8%。2.以BSA-CuNCs作为荧光信号探针,构建了一种无标记的、灵敏的、选择性好的荧光传感方法,用于多巴胺(DA)的检测。在该方法中,DA可以在碱性条件下容易被环境的O2氧化生成醌式化合物,醌式化合物作为电子受体,可以和BSA-CuNCs之间发生电子转移,导致BSA-CuNCs荧光信号猝灭。随着DA浓度的不断增加,BSA-CuNCs荧光强度逐渐降低。该方法检测DA的线性范围为1.0×10-7-6.0×10-5 mol/L,LOD为3.0×10-88 mol/L(S/N=3)。同时该方法可以用于于盐酸多巴胺注射液样品中DA的检测,加标回收率为99.3%-104.3%。3.基于S2-对BSA-CuNCs的荧光信号增强现象,开发了一种简便、非标记、信号增强型的荧光传感新方法用于S2-的灵敏检测。当体系中存在S2-时,S2-与BSA-CuNCs发生相互作用,导致分散的BSA-CuNCs发生聚集现象,使得BSA-CuNCs荧光强度增强。该荧光传感新方法成功实现对S2-的检测,S2-的线性检测范围为1.0×10-6-8.0×10-5 mol/L,LOD为3.0×10-7 mol/L(S/N=3)。同时,该方法已成功地应用于实际水样品中S2-的测定,加标回收率为98.5%-104.6%。
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