白藜芦醇对人食管癌EC9706细胞周期和凋亡的影响及其作用机制

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目的:食管癌是目前很常见和死亡率非常高的一个疾病,5年生存率只达20%。寻求一种高效低毒的抗肿瘤药物是治疗食管癌的当务之急。白藜芦醇(Resveratrol, Res)对体外培养的多种人类肿瘤细胞存在一定的抑制和细胞毒作用。本研究以体外培养的食管癌EC9706细胞为研究对象,进一步了解Res治疗食管癌的效果并探讨其作用机制,为预防和治疗食管癌提供理论依据。方法:不同浓度的Res处理体外培养的食管癌EC9706细胞并作用不同时间。1 MTT法分析Res对EC9706细胞生长增殖的影响作用;2倒置相差显微镜下观察形态学改变;电镜下观察细胞内微观改变;3流式细胞术分析Res对EC9706细胞周期分布的影响;4流式细胞术检测Res对EC9706细胞相关蛋白基因表达的影响。结果:1 MTT分析结果不同浓度的Res对EC9706细胞的生长均有抑制作用。当作用时间-定时,随着Res浓度的增加,EC9706细胞的生长抑制率呈逐渐上升,表现为剂量-效应关系;当Res浓度一定时,不同作用时间,抑制率也呈上升趋势,表现为时间-效应关系。2形态学变化倒置显微镜下观察,Res组与对照组比较,胞浆内的颗粒增粗增多,细胞质较少,细胞变圆变小,形态呈多样性;透射电镜观察发现核染色质浓缩边集于核膜,电子密度增加,部分细胞膜向外层呈锐角突起,细胞质内有空泡化变性。3流式细胞术分析细胞凋亡的结果500μmol/ml、1000μmol/ml的白藜芦醇作用于EC9706细胞72h后,G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰。凋亡率分别为9.54%土0.52%和19.85%士0.66%(p<0.01),用药后的细胞G0/G1期比例增高,与未用药组细胞的42.0%士1.23%相比,分别上升至59.5%土1.28%和68.50%±1.69%,而细胞的S期和G2/M期的比例均减小。4流式细胞术分析蛋白表达的结果500μmol/ml、1000μmol/ml的白藜芦醇作用于EC9706细胞72h后,bcl-2蛋白表达降低,荧光指数分别为0.75±0.06,0.69±0.08。bax蛋白表达升高,荧光指数分别为1.37±0.06,1.54±0.04。结论:白藜芦醇对人食管癌EC9706细胞具有增殖抑制与诱导其凋亡的作用,使其作用周期阻滞在G0/G1期;白藜芦醇通过影响凋亡基因bcl-2和bax,从而抑制细胞的增殖。
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