论文部分内容阅读
淋巴瘤/白血病是血液系统最常见的恶性肿瘤,相关基因突变及表达异常跟其发病密切相关,研究相关致病基因突变、表达异常及调控机制有助于阐明其发病机理,寻找到特异的治疗手段,提高其疗效和生存率。【目的】1.研究Burkitt淋巴瘤/白血病中,miR-181b与FAMLF基因表达的相关性。2.生物信息学分析FAMLF基因上是否存在miR-181b的作用靶点。3.实验证明在Burkitt淋巴瘤Raji细胞株中,miR-181b能直接作用FAMLF基因,下调其表达,抑制细胞增殖。【方法】1.应用实时定量PCR方法检测Burkitt淋巴瘤/白血病人中miR-181b与FAMLF的相对表达水平,绘制基因相对表达量的散点图,采用统计学软件SPS S19.0分析两者的相关性。2.采用生物信息学软件PITA、RNAhybrid、TargetScan、RNA22等分析miR-181b作用的靶基因以及FAMLF基因上miRNA作用靶点。3.分别转染miR-181b mimic以及阴性对照物进Burkitt淋巴瘤Raji细胞株,采用实时定量PCR检测mi R-181b的表达水平,采用实时定量PCR和Western blot分别检测FAMLF基因mRNA和蛋白的表达水平改变,采用MTT法检测转染miR-181b mimic后对Raji细胞株增殖的影响,采用PI法检测转染miR-181b mimic后细胞周期改变。4.分别构建野生型和突变型FAMLF基因荧光素酶报告基因载体,分别与miR-181b mimic及其阴性对照物共转染293T细胞,观察其荧光素酶基因活性的改变,验证miR-181b是否对FAMLF基因有直接调控作用。【结果】1.实时定量PCR检测Burkitt淋巴瘤/白血病人中miR-181b与FAMLF的表达水平,散点图和SPSS统计软件分析显示两者的表达水平呈显著负相关。2.生物信息学软件分析结果表明在FAMLF基因5′UTR上存在miR-181b的作用靶点。3.与对照组比较,转染miR-181b mimic的Raji细胞株miR-181b表达水平明显提高,FAMLF基因mRNA及其蛋白表达水平下调,并且与对照组比较,转染miR-181b mimic后,Raji细胞增殖减慢,细胞周期阻滞。4.荧光素酶报告基因实验结果显示,与对照组比较,共转染野生型FAMLF基因和mi R-181b mimic后,荧光素酶基因活性明显下降。【结论】1.Burkitt淋巴瘤/白血病人中miR-181b与FAMLF的表达呈显著负相关。2.FAMLF基因5′UTR上存在miR-181b的作用靶点。3.Burkitt淋巴瘤Raji细胞中miR-181b能直接下调FAMLF的表达抑制细胞的增殖活性。