泥鳅Elovl4基因克隆、功能鉴定及其互作蛋白的筛选

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaofch22
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)具有影响鱼类的脂代谢、细胞膜功能、免疫性能、生长和繁殖性能等的生理功能特性。ELOVL4是一种位于内质网上膜蛋白,具有调节超长链饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的功能。ELOVL4是目前硬骨鱼类延长酶家族的主要研究对象。泥鳅作为一种小型经济鱼类,关于其elov4基因研究鲜有报道。本论文主要以泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)为研究对象,对脂肪酸合成的关键酶ELOVL4展开相关研究,为elovl4基因在脂肪酸合成代谢中的功能研究提供理论基础。主要研究内容结果如下:1.泥鳅elovl4基因生物学信息和不同组织表达分析本研究中,通过RACE克隆获得了泥鳅elovl4a和elovl4b c DNA全序列。泥鳅elovl4a和elovl4b基因全长分别为2423和2054bp,编码315和300个氨基酸。泥鳅elovl4a和elovl4b分别与斑马鱼的elovl4a和elovl4b的相似度很高,而两者之前的相似度却较低。通过对泥鳅elovl4a和elovl4b在泥鳅不同发育时期和不同组织表达分析发现,elovl4a基因除了在心脏组织不表达外,在其余组织均有表达。而elovl4b基因主要特异性表达于眼睛、脑、肾脏、脾脏、肠道及肌肉组织。在不同发育时期,elovl4a和elovl4b从受精卵开始高达,并且在整个胚胎发育时期均表达量很高。2.泥鳅elovl4基因在酵母及鳍条细胞中的功能鉴定对elovl4a和elovl4b的功能进行验证分析,在酿酒酵母外源表达系统发现其具有延长脂肪酸的能力,特别是将C18不饱和脂肪酸延长为更长链的不饱和脂肪酸。泥鳅elovl4a和elovl4b均可将本实验添加的脂肪酸18:2n-6,18:3n-3,18:3n-6,20:4n-6和20:5n-3延长为更长链脂肪酸。进行了泥鳅鳍条细胞添加不同浓度的18:2n-6和18:3n-3后elovl4a和elovl4b基因表达变化实验。结果表明添加外源脂肪酸后,泥鳅鳍条的elovl4a和elovl4b均显著性的上调。上述结果表明泥鳅elovl4基因可将C18不饱和脂肪酸延长为C20不饱和脂肪酸。本研究系统性的研究了elovl4对C18不饱和脂肪酸的延长能力,完善了elovl4在HUFA合成中的功能。3.ELOVL4互作蛋白筛选为筛选出ELOVL4的互作蛋白,本研究构建了斑马鱼酵母双杂交c DNA文库。结果表明c DNA文库重组率为94.4%,插入片段范围为300-2000bp,说明构建的酵母双杂交c DNA文库质量良好。构建并鉴定了p GBKT7-ELOVL4诱饵载体,检测了其自转录活性和细胞毒性。结果表明p GBKT7-ELOVL4在SD/-Trp固体上培养基有淡红色酵母菌生长,在SD/-Trp/X-α-gal固体培养基上有淡蓝色酵母菌生长,在SD/-Trp/X-α-gal/Ab A无酵母菌生长;且生长于SD/-Trp培养基的p GBKT7-BD酵母菌大小与实验组无差异。表明p GBKT7-ELOVL4诱饵载体无自激活且无细胞毒性,可应用于筛选其互作蛋白。通过酵母双杂交,筛选到与ELOV4A互作的蛋白12个,与ELOVL4B互作的蛋白12个。ELOVL4A主要与参与卵巢功能、肌肉组织、胚胎发育和脂肪代谢的蛋白发生相互作用,ELOVL4B主要与参与卵巢、肌肉和胚胎发育的蛋白存在相互作用,为ELOVL4的后续研究奠定了基础。
其他文献
阿尔兹海默症(Alzheimer’s Disease,AD)是一种大脑神经退行性疾病。随着中国老龄化的人口数量急剧增长,AD患者的数量每年也在大幅度增长,给社会和家庭都带来了沉重的负担。AD具体的发病机制到目前为止仍不完全清楚,但现在确定的是,它是一种由多种因素导致的疾病。其中年龄的衰老是导致发病的主要风险因素之一。在前期的研究中,已经有多种药物被开发用于AD的治疗,但结果显示现有的药物在治疗AD
学位
鼢鼠是东亚特有的地下啮齿动物,穴居的生活方式造就了其高耗能的特点,导致其食性广食量大,取食造林树种根系,对我国北方林业生态恢复工程建设造成严重的危害。科学家从鼢鼠的防治实践中开始了对鼢鼠的研究,了解鼢鼠食性可以为制定无害化防治措施提供理论依据。动物食性和胃内容物微生物有着密切的联系,食物是胃内容物微生物定植的主要途径和主要驱动因素,增进对胃内容物微生物群组成与食物变化的关系的认识,是了解动物-食物
学位
单木结构参数作为森林资源调查最主要的测树因子,对森林生长状况的估测、森林碳库的估算等方面起着重要作用。无人机倾斜摄影测量技术以其有作业灵活、高效快捷等特点,成为目前快速准确获取单木结构参数的研究方法之一。本研究以银杏(Ginkgo biloba L.)阔叶林为研究对象,基于无人机倾斜摄影数据,实现了三维点云模型重建,获取了研究区的密集匹配点云及冠层高度模型(Canopy Height Model,
学位
高度重视思想政治教育是党长期以来的政治优势和优良传统。延安时期是党的历史上具有特殊意义的重要时期,这一时期中国共产党以陕甘宁边区为主要阵地,传承历史并总结经验,对农民开展了内容丰富的思想政治教育,充分调动了农民的积极性,为革命胜利提供了强大的精神动力和思想保障。延安时期,陕甘宁边区作为党中央指挥全国革命的大本营,是全国政治上最进步的区域,其开展思想政治教育的理论经验和实践探索对于当前农村工作的开展
学位
生物乙醇是一种新型的可替代能源,具有环境友好和原料来源广泛等特点。生产生物乙醇过程中,将纤维原料转化成葡萄糖这一步至关重要,而这一过程受到许多因素的影响,如底物因素,酶因素,水解环境因素等。木质纤维中半纤维素覆盖在纤维素表面,降低了纤维素酶对纤维素的可及性,导致纤维素酶水解得率不理想。目前对半纤维素的研究主要集中在木聚糖中(阔叶木和禾本科植物半纤维素主要成分),对甘露聚糖(针叶木半纤维素主要成分)
学位
土壤盐渍化制约着灌溉农业的可持续发展。面对时空变异性极强的土壤盐分,利用多种尺度转换方法实现遥感数据尺度上推,促成不同尺度下地表盐分信息的遥感反演,有利于揭示和把握复杂的盐渍化地理变化规律,提升遥感技术对土壤盐分的监测精度。本研究以内蒙古河套灌区沙壕渠灌域为研究区,挑选灌域内四块盐渍化程度不一的地块作为试验区域,以4月份(春灌前)和6月份(春灌后)两个时期实地采集获取的土壤样本为研究对象,利用与地
学位
设施农业的技术水平、综合管理水平是决定农业现代化的重要因素,我国作为一个农业大国近年设施农业得到长足发展,但由于我国设施农业起步较晚,与一些农业发达国家相比依然存在很大差距。日光温室作为设施农业的重要组成部分,在解决老百姓“菜篮子”这一重大民生问题中发挥了很大作用,给生产者也带来了可观的经济效益。虽然这些年我国陆续颁布了一系列的有关日光温室建设标准和规范规程等推荐性文件,但各地农户在建设温室的时候
学位
土壤盐渍化对果树的产量和品质具有重要影响。冬枣(Ziziphus jujuba Mill cv.Dongzao)是原产我国渤海湾地区的鲜食枣品种,其品质优、耐盐碱。而植物的根际微生物对植物生长发育具有重要影响,可以在一定程度上缓解植物盐胁迫。因此研究冬枣等耐盐植物的根际微生物对盐碱地冬枣栽培具有重要意义。为了研究盐碱土壤冬枣根际土壤微生物多样性和群落结构及其对冬枣果实品质的影响,论文选取陕西大荔县
学位
新城疫(Newcastle Disease,ND)是一种由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)强毒株引起对多种禽类具有极强传染性和致死性的疾病。根据对鸡的致病程度,将NDV分为强毒株、中强毒株和弱毒株,其中强毒株有时可导致家禽全部死亡。已有研究报道,NDV的膜融合活性和毒力与融合(F)蛋白和血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白直接相关,是病毒感染细胞发生膜融合引起合胞体病
学位
为了筛选出具有较强免疫原性的猪圆环病毒3型(Porcine circovirus virus type 3,PCV-3)核衣壳(Cap)蛋白多肽,试验应用生物信息学技术,通过Garnier-Robson和Chou-Fasman两种方法分析PCV-3-Cap蛋白的二级结构,Kyte-Doolittle方法分析亲水性,Karplus-Schulz方法分析柔性,Emini方法分析表面可能性,Jameso
期刊