第一部分中枢JAZF1对外周糖代谢的影响及其作用机制　　第一节中枢JAZF1在胰岛素抵抗模型鼠中的表达　　目的：探索中枢JAZF1在胰岛素抵抗模型鼠中的表达变化，初步了解中枢JAZF1与胰岛素抵抗的关系。　　方法：将8周龄的SD大鼠随机分为普食喂养组和高脂喂养组；同样的将C57BL/6J小鼠、脂联素敲除小鼠分别随机分为普食喂养组和高脂喂养组，各组分别普食和高脂喂养12周；同时普食喂养db/db鼠20周。采用Western Blot技术分别检测SD大鼠、C57BL/6J小鼠、脂联素敲除小鼠以及db/db鼠下丘脑中JAZF1的相对蛋白水平表达。　　结果：与普食喂养组相比，在高脂喂养的 SD大鼠中、C57BL/6J小鼠、脂联素敲除小鼠中，下丘脑JAZF1蛋白水平显著降低(P<0.01)；并且，糖尿病模型鼠db/db鼠下丘脑的JAZF1蛋白水平也明显降低(P<0.01)。　　结论：中枢JAZF1与胰岛素抵抗的发生发展具有密切相关性。　　第二节中枢JAZF1表达上调对肝脏糖异生及体内外胰岛素信号通路的影响　　目的：探索中枢JAZF1对肝脏糖异生、中枢及外周经典胰岛素信号通路的影响。　　方法：将健康雄性SD大鼠随机分为两大组：普食喂养组（NCD）和高脂喂养组（HFD）。各组小鼠分别普食和高脂喂养10周后，又将各组分别随机分为三个亚组：生理脑脊液组（aCSF）、空载腺病毒组（Ad-GFP）和 JAZF1过表达腺病毒组（Ad-JAZF1）。利用定量 PCR技术检测肝脏糖异生关键基因 PEPCK和 G6Pase的 mRNA水平；Western Blot技术检测肝脏糖异生关键基因PEPCK和G6Pase的蛋白水平变化、肝脏及下丘脑中经典胰岛素信号通路指标磷酸化水平的变化；免疫荧光染色技术检测下丘脑PIP3的表达变化。体外实验：常规培养神经元模型细胞人神经母细胞瘤细胞sh-SY5Y细胞，用胰岛素抵抗诱导剂Glucosamine构建神经元胰岛素抵抗模型，再转入Ad-JAZF1过表达质粒，检测模型细胞中胰岛素信号通路指标 p-InsR/t-InsR及p-AKT/t-AKT磷酸化水平的变化。　　结果：普食喂养组中，三个亚组糖代谢水平无显著差异(P>0.05)；而在高脂喂养组中，与aCSF组和Ad-GFP组相比，Ad-JAZF1组PEPCK和G6Pase的mRNA水平以及相对蛋白水平均显著降低(P<0.01)，而经典胰岛素信号通路指标的磷酸化水平均明显增高(P<0.01)。体外实验中，胰岛素刺激下，非胰岛素抵抗组Ad-GFP组与Ad-JAZF1组的胰岛素信号通路指标无显著差异(P>0.05)，而在胰岛素抵抗组中， Ad-JAZF1组的胰岛素信号通路指标磷酸化水平明显增加(P<0.01)。　　结论：中枢JAZF1基因表达上调，可以抑制肝脏糖异生水平，激活肝脏及中枢的经典胰岛素信号通路，改善机体的胰岛素抵抗状态。　　第三节中枢JAZF1影响外周糖代谢的信号通路及其作用机制　　目的：验证中枢JAZF1改善肝脏糖代谢的信号通路。　　方法：筛选中枢JAZF1影响肝脏糖异生的信号通路，将健康雄性大鼠分为2大组，分别为：肝迷走神经离断组，K离子通道阻断组。两组组均用高脂喂养，并分别分为四个亚组。肝迷走神经离断组分为：假手术组（SHAM）+Ad-GFP，SHAM+Ad-JAZF1，肝迷走神经离断组（HVG）+Ad-GFP，HVG+Ad-JAZF1；K离子通道阻断组分为：Ad-GFP组，Ad-JAZF1组，格列本脲（GLI）+ Ad-GFP组，GLI+Ad-JAZF1组。建立下丘脑 MBH区域靶向给药系统，行选择性肝迷走神经离断术，利用定量PCR和Western Blot技术分别检测肝脏糖异生关键基因PEPCK和G6Pase的mRNA及蛋白相对水平表达变化。体外实验：分离及培养下丘脑神经元原代细胞，利用PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K信号通路，检测JAZF1过表达对下游K离子通道亚基蛋白（SUR1，Kir6.2）的影响。　　结果：肝迷走神经离断组：肝迷走神经离断手术后，中枢 JAZF1对肝脏PEPCK和G6Pase的降低作用明显减弱（P<0.05）；K离子通达阻断组：K离子通达阻断剂格列苯脲可以抑制中枢JAZF1降低肝脏PEPCK和G6Pase的作用（P<0.05）。体外实验：成功分离及培养下丘脑神经元原代细胞，JAZF1通过 PI3K途径调控 K离子通道蛋白亚基SUR1和Kir6.2。　　结论：中枢JAZF1主要通过PI3K途径调控K离子通道，经肝迷走神经向外周传递信号，从而对外周糖代谢产生影响。　　第二部分中枢Sfrp5对外周糖代谢的影响及其作用的信号通路　　第一节中枢Sfrp5在胰岛素抵抗模型鼠中的表达　　目的：探索中枢Sfrp5在胰岛素抵抗模型鼠中的表达变化，初步了解中枢Sfrp5与胰岛素抵抗的关系。　　方法：将8周龄的C57BL/6J小鼠、脂联素敲除小鼠分别随机分为普食喂养组和高脂喂养组，各组分别普食和高脂喂养12周；同时普食喂养db/db鼠20周。采用Western Blot技术分别检测C57BL/6J小鼠、脂联素敲除小鼠以及db/db鼠下丘脑中Sfrp5的相对蛋白水平表达。　　结果：与野生小鼠相比，糖尿病模型鼠db/db鼠下丘脑的Sfrp5蛋白水平明显降低(P<0.01)。与普食喂养组相比，高脂喂养的C57BL/6J小鼠、脂联素敲除小鼠下丘脑中的Sfrp5蛋白水平均显著降低(P<0.01)；并且，在普食喂养组和高脂喂养组组内，脂联素敲除小鼠下丘脑Sfrp5蛋白较野生小鼠水平均显著降低(P<0.01)。　　结论：中枢Sfrp5与胰岛素抵抗的发生发展具有密切相关性。　　第二节中枢Sfrp5表达上调对肝脏糖异生及体内外胰岛素信号通路的影响　　目的：探索中枢Sfrp5对肝脏糖异生、中枢及外周经典胰岛素信号通路的影响。　　方法：将健康雄性SD大鼠随机分为两大组：普食喂养组（NCD）和高脂喂养组（HFD）。各组小鼠分别普食和高脂喂养10周后，又将各组分别随机分为两个亚组：生理脑脊液组（aCSF）和 Sfrp5重组蛋白输注组（Sfrp5）。利用定量PCR技术检测肝脏糖异生关键基因PEPCK和G6Pase的mRNA水平；Western Blot技术检测肝脏糖异生关键基因PEPCK和 G6Pase的蛋白水平变化、肝脏及下丘脑中经典胰岛素信号通路指标磷酸化水平的变化；免疫荧光染色技术检测下丘脑PIP3的表达变化。体外实验：常规培养神经元模型细胞人神经母细胞瘤细胞sh-SY5Y细胞，用胰岛素抵抗诱导剂Glucosamine构建神经元胰岛素抵抗模型，再加入Sfrp5重组蛋白，检测模型细胞中胰岛素信号通路指标p-InsR/t-Ins及p-AKT/t-AKT磷酸化水平的变化。　　结果：普食喂养组中，两个亚组糖代谢水平无显著差异(P>0.05)；而在高脂喂养组中，与aCSF组相比， Sfrp5组PEPCK和G6Pase的mRNA水平以及相对蛋白水平均显著降低(P<0.01)，而经典胰岛素信号通路指标的磷酸化水平均明显增高(P<0.01)。体外实验中，胰岛素刺激下，非胰岛素抵抗组对照组与Sfrp5组的胰岛素信号通路指标无显著差异(P>0.05)，而在胰岛素抵抗组中，Sfrp5组的胰岛素信号通路指标磷酸化水平较对照组明显增加(P<0.01)。　　结论：中枢Sfrp5基因表达上调，可以抑制肝脏糖异生水平，激活肝脏及中枢的经典胰岛素信号通路，改善机体胰岛素抵抗状态。