论文部分内容阅读
目的:牙周炎是由菌斑微生物引起的一种慢性炎症性疾病,炎症细胞在局部聚集并释放炎症因子,导致牙齿支持组织破坏,牙槽骨吸收,并最终造成牙齿松动、脱落。以往研究表明:龈沟液、血液、唾液中的钙结合蛋白水平与牙周炎关系密切,可作为牙周炎的生物标志物。然而,钙结合蛋白的两个蛋白亚基S100A8、S100A9的表达水平与牙周炎的关系尚存在争议。为此,本研究通过比较牙周健康者和牙周炎患者的牙龈组织中钙结合蛋白亚基S100A8、S100A9及其受体Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的表达分布、细胞定位、表达水平,分析S100A8、S100A9、TLR4表达水平与牙周临床指标的相关性,并检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)S100A8、S100A9、TLR4表达水平的影响,明确S100A8、S100A9、TLR4的表达水平与牙周炎的关系,探讨其在牙周免疫炎症反应中可能发挥的作用。方法:共纳入牙周健康者5例、牙周炎患者12例。记录每位参与者的牙周临床指标,包括:探诊深度(Probing depth,PD)、附着丧失(Attachment loss,AL)、出血指数(Bleeding index,BI)。收集新鲜牙龈组织标本,4%多聚甲醛溶液固定,常规制作石蜡切片,通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察组织学形态结构,免疫组织化学法检测S100A8、S100A9、TLR4在健康及牙周炎组织标本中的表达分布、细胞定位,采用Image J软件对牙龈组织中S100A8、S100A9、TLR4的表达水平及阳性细胞率进行半定量分析,通过SPSS24.0软件进行统计学分析。取牙冠延长术切下的健康牙龈组织,组织块法原代培养HGFs 3例,显微镜下观察细胞形态,免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,取四到六代细胞用于实验。实验分为空白对照组、低浓度P.g LPS组(0.1μg/m L)、高浓度P.g LPS组(1μg/m L),分别作用于HGFs 0、12、24 h,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Realtime Polymerase Chain Reaction,q PCR)检测HGFs中S100A8、S100A9、TLR4的表达水平。结果:(1)在健康牙龈组织中,S100A8、S100A9、TLR4在上皮棘层、基底细胞层和结缔组织中少量浸润的炎症细胞内呈弱阳性至中阳性表达,S100A8、TLR4在血管内皮细胞和牙龈成纤维细胞呈弱阳性表达;在炎症牙龈组织中,S100A8、S100A9、TLR4在上皮全层和结缔组织中大量浸润的炎症细胞内呈强阳性表达,在血管内皮细胞和牙龈成纤维细胞内呈中阳性表达。(2)与健康对照组相比,牙周炎组的牙龈上皮和结缔组织中S100A8、S100A9、TLR4的表达水平显著升高,牙周炎组的结缔组织中S100A8、S100A9、TLR4的阳性细胞率显著升高。(3)S100A9在牙龈上皮和结缔组织中的表达水平与牙周临床指标(PD、AL、BI)显著正相关。(4)q PCR结果显示:与空白对照组相比,1μg/m L P.g LPS刺激HGFs 12 h后,HGFs中S100A8、S100A9的m RNA表达水平显著升高,TLR4的m RNA表达水平虽然有升高的趋势,但没有统计学显著性。结论:(1)与牙周健康者相比,牙周炎患者牙龈组织S100A8、S100A9、TLR4的表达水平均显著增高,表达S100A9的细胞类型更丰富;S100A9的表达水平与牙周临床指标显著正相关。(2)HGFs中可检测到S100A8、S100A9、TLR4的表达,P.g LPS可显著上调HGFs中S100A8、S100A9的表达水平。