致密核心囊泡分泌过程中所需的Rab蛋白及其效应物

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细胞内各个细胞器之间囊泡的膜转运过程是真核细胞存在的基本。Rab蛋白确保了转运蛋白被运输至正确的目的地。Rab蛋白是小GTP酶中的一大家族,它通过募集其效应物蛋白,其中包括接头蛋白,栓系因子,激酶,磷酸酶以及动力蛋白等,调控了细胞膜的选取,囊泡出芽,去包被,转运以及膜融合等过程。线虫作为模式生物有很多优势,例如生活周期短,遗传操作方便,虫体透明等,这些优势有利于神经传递的分子机制研究。本文主要以线虫为研究对象,研究在致密核心囊泡(DCV)分泌过程中所需的Rab蛋白及其效应物。致密核心囊泡分泌的转运,栓系,锚定和成熟等过程的分子机制现在还存在争论。在我们的研究中,我们使用线虫这种模式生物来研究Rab蛋白和它的效应物在致密核心囊泡分泌过程中起到的作用。我们通过分析腔胞吸收GFP标记的神经肽的荧光强度检测活体线虫中神经肽的释放。随后我们应用全内反射荧光显微镜(TIRFM)技术来追踪单个致密核心囊泡在细胞膜附件的运动。通过这些方法,我们发现RAB-27/AEX-6是神经肽释放所必须的,而和RAB-27密切同源的RAB-3则不是神经肽释放所必须的。我们发现RAB-27/AEX-6和致密核心囊泡的转运和栓系相关。我们进一步发现不同的Rab蛋白效应物作用于致密核心囊泡分泌的不同步骤:Rabphilin/RBF-1与最初的栓系和稳定的锚定相关,而RIM/UNC-10则是作用于稳定的锚定并且为致密核心囊泡的融合做准备。RAB-27和Rabphilin/RBF-1相互作用调控了囊泡和细胞膜的最初的栓系过程以及随后的锚定步骤;至于active zone(活性域)蛋白RIM/UNC-10则在致密核心囊泡的锚定和成熟过程中起作用。
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