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目的: 表皮生长因子受体抑制剂(Epithelial growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKIs)已经成为ERFG阳性突变肺癌患者的标准一线治疗方案,但是用药后经过10~12个月的中位期,都不可避免的发生耐药。本研究的目的旨在探讨乙酰半胱氨酸( N-Acetyl-L-Cysteine, NAC)能否改善非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)细胞株PC-9GR对Gefitinib的耐药及可能的分子机制。 方法: 第一部分:CCK8法验证诱导的PC-9GR细胞株对Gefitinib的耐药性;光学显微镜下观察PC-9GR细胞株形态的改变;用不同浓度的NAC处理PC-9GR细胞株,计算其半数抑制浓度( half maximal inhibitory concentration,IC50),用联合用药指数(Combination index,CI)探讨NAC与Gefitinib用是否具有协同作用;Western Blot法检测PC-9、PC-9GR细胞株上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关表型蛋白的表达情况。 第二部分:将PC-9GR细胞株分为Control组,NAC组,Gefitinib组,NAC+Gefitinib组,PP2组、PP2+Gefitinib组。transwell小室检测各组细胞细胞侵袭能力;划痕实验检测各组迁移能力;流式细胞术检测各组凋亡水平;qRT-PCR法检测各组E-cadherin、Vimentin的表达水平;Western Blot法检测各组E-cadherin、Vimentin、Src、P-src、Bax、Bcl-2的表达情况。 结果: CCK8法检测结果显示, PC-9细胞株 Gefitinib的 IC50为0.05471±0.0241μM, PC-9GR细胞株 Gefitinib的 IC50为7.711±0.8723μM,是敏感株PC-9的141倍,说明PC-9GR对Gefitinib高度耐药。PC-9GR细胞株NAC的IC50为15.53±0.139mM。 光学显微镜下观察PC-9细胞株呈圆形,球形,细胞体积较大,细胞间粘附较紧密,耐药株PC-9GR呈长梭形,纺锤形,细胞体积较PC-9细胞株小,细胞间粘附松弛。 在一定浓度范围内,NAC与Gefitinib联用时,其CI<1,说明两药联用具有协同作用。 Transwell小室结果:NAC+Gefitinib组的穿膜细胞数明显少于Control组和NAC组(P<0.001);与Gefitinib组相比较,NAC+Gefitinib组的细胞穿膜数也明显小于单独用药组(P<0.01)。 划痕实验结果显示:NAC+Gefitinib组的迁移距离小于Control组(P<0.001),同时也小于NAC组和Gefitinib组(P<0.05)。 qRT-PCR结果:在Control组,NAC组,Gefitinib组,NAC+Gefitinib四组中,联合用药组E-cadherin的mRAN表达水平高于其他三组(P<0.05),Vimentin的mRAN表达水平低于Control组(P<0.01),在Control组,NAC组,Gefitinib组三组间无统计学意义。用Src抑制剂PP2联合Gefitinib可以得到相一致结果。 Western Blot结果:PC-9细胞株E-cadherin表达明显,Vimentin表达较低,PC-9GR呈相反趋势,说明从敏感株到耐药株发生了EMT。在Control组,NAC组,Gefitinib组,NAC+Gefitinib组四组中,联合用药组的E-cadherin表达最多,Vimentin的表达最少,Src在各组中的表达水平大致相同,磷酸化的Src(P-Src)在Control组表达最多,在联合用药组表达最少。PP2联合Gefitinib组中E-cadherin和Vimentin表达结果相一致。NAC+Gefitinib联合用药组与其他组相比较,促凋亡蛋白Bax在表达最多,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达最少。 流式细胞术结果:Control组,NAC组,Gefitinib组,NAC+Gefitinib组的凋亡率分别为:(5.2±1.02)%、(10.42±1.12)%、(10.79±0.94)、(20.85±2.01)%,NAC+Gefitinib组的细胞凋亡率高于Control组(P<0.01),同时也高于单独用药组(P<0.05)。 结论: 1.通过Gefitinib诱导的获得PC-9GR细胞株对其高度耐药,细胞呈EMT表型改变; 2.NAC与Gefitinib联用具有协同作用,可抑制细胞的增殖,迁移,促进细胞的凋亡; 3.NAC可能是通过抑制Src的激活逆转EMT,改善PC-9GR细胞株对Gefitinib的耐药。