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目的:鼻咽癌是国内高发的恶性肿瘤之一,尤其是在两广地区较为常见,严重影响了我国人民的健康生活水平。此外,由于鼻咽癌的发病部位特殊,较为隐匿,给鼻咽癌的早期诊断与治疗造成困难。近些年,大量研究表明抑癌基因的失活与鼻咽癌的发生、发展密切相关。本课题组前期的研究首次发现SDF2L1基因在鼻咽癌组织中的表达低于鼻咽癌组织。SDF2L1沉默表达基因后促进鼻咽癌细胞的迁移与侵袭。SDF2L1低表达导致鼻咽癌CNE1细胞株上皮-间质转化(EMT)有关的E-钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-9表达改变,提示SDF2L1基因可能参与了鼻咽癌的发生、发展,且可能与鼻咽癌细胞的侵润、远处转移有关。然而并没有同时进行SDF2L1沉默表达和过表达后对不同的鼻咽癌细胞株生物学功能的影响研究,对于SDF2L1低表达的产生机制、所调控下游的靶基因、参与的信号通路、对鼻咽癌患者的临床预后影响尚不清楚,有待课题组进一步深入研究。本实验的目的是研究SDF2L1基因过表达与沉默表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法:1.应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测人正常鼻咽部上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞株HONE1、HK1、CNE2和5-8F细胞中SDF2L1 mRNA的表达水平。2.构建分别含SDF2L1基因过表达片段、SDF2L1基因干扰片段及其相应的空载片段的慢病毒载体并转染鼻咽癌细胞株HONE1和5-8F,用嘌呤霉素筛选稳定耐药株。其中将转染SDF2L1基因过表达及干扰片段的细胞作为实验组,转染空载片段的细胞作为空载对照组,未经转染的HONE1和5-8F细胞株作为空白对照组。转染72h后,在倒置荧光相差显微镜下进行观察、拍照并计算转染效率。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)分别测定各组细胞中SDF2L1的mRNA和蛋白的相对表达量。3.分别用划痕实验和Transwell迁移实验以及Transwell侵袭实验研究SDF2L1过表达及沉默表达对各组细胞迁移及侵袭能力的影响。4.通过平板克隆形成实验、细胞增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测各组细胞的生长、增殖能力。结果:1.RT-PCR实验结果显示:SDF2L1 mRNA在HONE1和5-8F细胞中的相对表达量均低于NP69细胞(P值分别为0.0062,0.0351),差异均具有统计学意义;SDF2L1 mRNA在CNE2细胞中的相对表达量与NP69比较,差异无统计学意义(P>0.05);SDF2L1 mRNA在HK1细胞中的相对表达量高于NP69,差异有统计学意义(P<0.05)。2.qRT-PCR和WB验证SDF2L1沉默和过表达结果显示:用携带SDF2L1基因过表达片段的慢病毒载体进行稳定转染得到SDF2L1过表达的HONE1和5-8F实验组的SDF2L1 mRNA及蛋白的相对表达量均明显高于其空载对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。用携带SDF2L1基因干扰片段的慢病毒载体进行稳定转染得到的SDF2L1沉默表达实验组的SDF2L1 mRNA及蛋白的相对表达量均明显低于其空载对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.划痕实验结果显示,SDF2L1过表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组相比,其划痕愈合率均明显减小,差异均具有统计学意义(P<0.05);SDF2L1沉默表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组相比,其划痕愈合率明显增大,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移和Transwell侵袭实验结果显示,SDF2L1过表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组相比,其穿过膜细胞数明显下降,其侵袭迁移能力明显受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05);SDF2L1沉默表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组相比,其穿过膜细胞数明显增多,其迁移与侵袭能力明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。4.细胞克隆形成实验显示,SDF2L1过表达的鼻咽癌细胞生长速度较慢,形成的克隆较小,且其克隆形成率明显低于空载对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SDF2L1沉默表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组比较,其克隆形成率明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。CCK-8实验结果显示:各组细胞0h测定的OD值差异无统计学意义(P>0.05),从第24h开始,SDF2L1过表达的各组细胞各时间点OD值均明显低于其空载对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SDF2L1沉默表达组各时间点OD值均明显高于其空载对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.SDF2L1过表达抑制了鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力,SDF2L1沉默表达促进了鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力。2.SDF2L1过表达可明显抑制鼻咽癌细胞生长、增殖能力;SDF2L1沉默表达可明显促进鼻咽癌细胞生长、增殖能力。