论文部分内容阅读
目的:通过对乳腺癌中annexin A2表达异常及其泛素化调节机制、annexin A2与乳腺癌TNM临床分期间的关系进行研究,探讨泛素化调节annexin A2表达异常在乳腺癌发生发展中的作用。材料与方法:1.材料:手术切除的新鲜乳腺组织共10例,包括癌组织及癌旁(>2cm)组织(在组织学和形态学上相对正常的乳腺组织),病理诊断为浸润性导管癌,临床分期为:T1N0M0(2例),T2N0M0(4例),T2N1M0(1例),T3N1M0(3例);免疫组化标本选取不同分期的乳腺癌及癌旁组织切片标本共38例(10例为本课题中手术取材标本,28例由病理科提供)。2.方法:分别使用抗泛素化抗体和抗annexin A2抗体对乳腺癌及癌旁组织蛋白质SDS-PAGE胶进行western blotting分析,观察乳腺癌中蛋白质泛素化情况及annexin A2的表达情况;使用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术对乳腺癌及癌旁组织蛋白质进行分离,western blotting检测蛋白质的泛素化情况(免疫蛋白质组学),通过PDQuest 7.1软件对差异表达阳性结果进行分析,取稳定出现的差异阳性蛋白质点进行基质辅助激光解吸/电离时间飞行串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS/MS)及生物信息学分析;通过免疫组织化学染色技术对annexin A2在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达情况及其表达水平与乳腺癌TNM临床分期的关系进行观察,结果采用SPSS13.0软件进行统计学分析,组间比较用单因素卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果:对4个在乳腺癌组织表达增高的蛋白质点经过质谱鉴定和数据库比对,结果为:小泛素相关修饰因子3前体(SMT3A)、蛋白酶体亚单位a型1(PSMA1)、膜联蛋白2(annexin A2)、核糖体蛋白S12(RPS12)。免疫组化检测乳腺癌组织及癌旁组织中annexin A2的阳性表达率分别为89.47%(34/38)和42.10%(16/38),比较差异有统计学意义(P<0.05);在0期、Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期乳腺癌中,annexin A2表达的阳性率分别为:75%(6/8)、100%(14/14)、100%(10/10)和100%(6/6),annexin A2表达的强阳性率分别为:37.5%(3/8)、42.9%(6/14)、50%(5/10)和66.7%(4/6),比较差异有统计学意义(P<0.05),说明随着乳腺癌临床分期越晚,annexinA2的表达水平越高。通过免疫蛋白质组学观察到,通过抗泛素化一抗识别后在45.0kDa处的2-DE胶上有一蛋白质点在乳腺癌组织中高表达,取对应点质谱分析证实为annexin A2,说明annexin A2在乳腺癌组织中的表达受泛素化调节,且表达增高。结论:证实annexin A2在乳腺癌组织中表达明显高于癌旁组织,从而在乳腺癌细胞的浸润与转移中有重要作用;发现annexin A2受泛素化调节;发现随着乳腺癌TNM临床分期越晚,annexin A2表达水平的越高;泛素化调节的annexin A2的高表达可能与乳腺癌的发生、发展有关;对annexin A2的泛素化调节及annexin A2表达水平进行干预,可能是乳腺癌治疗的一种新思路。