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背景:胃癌是常见恶性肿瘤之一,在全球范围内,胃癌发病率和死亡率分别位居第四位和第二位。胃癌的诊治仍面临着很大的挑战,进一步理解胃癌的发生发展的分子机制,寻找新的生物标志物和治疗靶点迫在眉睫。非编码RNA(noncoding RNA,nc RNA)在细胞的发育、代谢及肿瘤等多种疾病的发生、发展方面发挥着重要的生物学作用。长链非编码RNA(long non-coding RNA,Lnc RNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA,缺乏明显的开放性阅读框架,外显子少,表达水平比蛋白质编码基因低。反义Lnc RNAs(NATs,Natural antisense transcripts),是一类从蛋白或非蛋白编码基因的相反链上转录而来的Lnc RNAs,它在肿瘤的发生与发展中亦发挥了重要的作用。肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(Lnc RNA AFAP1-AS1),是一种反义Lnc RNA,首先在barrett,s食管和食管腺癌中发现过表达。高表达的AFAP1-AS1在肿瘤的尺寸、TNM分期、血管侵犯和差的预后有关,并可影响肿瘤细胞增殖能力和促进肿瘤转移。但是,还没有证据显示AFAP1-AS1是否可以影响胃癌的发展过程。目的:检测肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(Lnc RNA AFAP1-AS1)在胃癌患者肿瘤组织与癌旁正常组织中的表达差异,分析其与临床预后的相关性。检测胃癌细胞及正常胃黏膜上皮永生细胞系中的表达水平,探讨AFAP1-AS1对胃癌细胞增殖与侵袭能力的影响,为胃癌提供新的诊断标志物和潜在的治疗靶点。方法:1.收集91例胃癌患者癌组织及癌旁5cm以上正常组织,QRT-PCR方法检测AFAP1-AS1在胃癌患者肿瘤组织及癌旁组织中的表达水平,同时收集患者个人信息和详细临床资料,统计分析AFAP1-AS1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期等病理因素之间的相关性,Lnc RNA AFAP1-AS1和患者临床病理学特征之间的关联用χ2检验。并用K-M生存曲线分析AFAP1-AS1表达水平对患者生存期的影响。用多因素COX回归分析确定胃癌患者的独立预测因素。2.运用QRT-PCR方法,分析AFAP1-AS1在四种人胃癌细胞谱系(AGS,BGC-823,MGC-803,SGC-7901)与人胃黏膜上皮永生细胞系GES-1细胞中的Lnc AFAP1-AS1表达情况。3.采用质粒介导si-AFAP1-AS1-1和si-AFAP1-AS1-2转染SGC-7901和BGC-823细胞后,干扰AFAP1-AS1在胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中的表达,检测si RNA干扰后AFAP1-AS1表达情况,用CCK-8实验测定3,4,5天时450nm吸光度OD值,绘制生长曲线,探讨AFAP1-AS1对细胞增殖能力的影响。4.采用质粒介导si-AFAP1-AS1-1和si-AFAP1-AS1-2转染SGC-7901和BGC-823细胞后,用流式细胞仪观察AFAP1-AS1基因敲低后对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823细胞周期的影响。5.采用质粒介导si-AFAP1-AS1-1和si-AFAP1-AS1-2转染SGC-7901和BGC-823细胞后,用Transwell迁移实验检检测AFAP1-AS1敲低后对细胞定向侵袭能力的影响。6.用Western blot方法检测si-AFAP1-AS1-1和si-AFAP1-AS1-2转染SGC-7901和BGC-823细胞后EMT相关基因E-钙蛋白和波形蛋白的表达变化。结果:1.胃癌组织中的AFAP1-AS1表达水平明显高于正常癌旁组织中的表达水平,差异有统计学意义(P=0.003)。AFAP1-AS1表达水平与患者淋巴结转移情况呈正相关及与胃癌患者的分期呈正相关,Ⅲ~Ⅳ期患者AFAP1-AS1表达水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者。但和其他因素如年龄,性别,组织学分化程度等无明确相关性。AFAP1-AS1低表达患者中位生存期33±2.887M,AFAP1-AS1高表达患者中位生存期19±1.635M,K-M生存曲线分析显示,与AFAP1-AS1低表达相比,AFAP1-AS1高表达患者预后更差,生存期更短。多因素COX回归分析显示,淋巴结转移、TNM分期和AFAP1-AS1表达水平都是胃癌病人OS的独立预测因素2.与人胃黏膜上皮永生细胞系GES-1细胞相比,四种人胃癌细胞谱系(AGS,BGC-823,MGC-803,SGC-7901)Lnc AFAP1-AS1表达明显增加(P<0.01)。3.采用质粒介导si-AFAP1-AS1-1和si-AFAP1-AS1-2转染SGC-7901和BGC-823细胞后,显著抑制了胃癌细胞SGC-7901或BGC-823的AFAP1-AS1表达水平。CCK8增殖实验结果显示,SGC-7901和BGC-823细胞组与si-NC组相比,在第3,4,5天时450nm吸光度OD值读数差异明显,结果有统计学意义(p<0.05)。证实AFAP1-AS1可以促进胃癌细胞增殖,封闭AFAP1-AS1可以显著抑制胃癌细胞SGC-7901或BGC-823的增殖能力。4.采用质粒介导si-AFAP1-AS1-1和si-AFAP1-AS1-2转染SGC-7901和BGC-823细胞后,SGC-7901和BGC-823后细胞G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少。证实了AFAP1-AS1基因敲除导致G0/G1细胞周期阻滞,并抑制S和G2/M细胞周期进程,提示AFAP1-AS1可以通过调控细胞周期分布对细胞的增殖能力起着增强作用。5.采用质粒介导si-AFAP1-AS1-1和si-AFAP1-AS1-2转染SGC-7901和BGC-823细胞后,Transwell法检测细胞的定向侵袭能力,结果证实AFAP1-AS1敲除后迁移细胞的数量明显减少,与si-NC组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。6.用Western blot方法检测了si-AFAP1-AS1-1和si-AFAP1-AS1-2转染SGC-7901和BGC-823细胞后EMT相关基因E-钙蛋白升高,波形蛋白降低。结论:1.Lnc RNA AFAP1-AS1在胃癌组织和细胞株中均呈高表达,在胃癌的发生、发展中可能起到癌基因的作用。2.Lnc RNA AFAP1-AS1表达水平还与胃癌病人的淋巴结转移和分期呈正相关,高表达的患者生存期短,预后不良。3.Lnc RNA AFAP1-AS1体外能够增强胃癌细胞的增殖、侵袭能力,并能影响胃癌细胞周期分布,敲低AFAP1-AS1后胃癌细胞的增殖、侵袭能力明显受到抑制。4.LncRNA AFAP1-AS1可能通过影响EMT过程亦即下调E-cadherin、上调vimentin表达而增强胃癌细胞的侵袭能力。5.Lnc RNA AFAP1-AS1可以作为潜在的胃癌生物标志物和治疗靶点。