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目的基于百草枯(PQ)造帕金森(PD)模型小鼠黑质lncRNA表达谱结果,选择lncRNA-AK039862进行研究。于体内动物层面及体外细胞层面中,探讨AK039862在PQ改变神经小胶质细胞或/和多巴胺能神经细胞中Pafah1b1/Foxa1表达变化中的作用。方法体内动物层面:(1)应用已建立的PQ致PD模型的方法,即0、5、10 mg/kg PQ、30 mg/kg 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)染毒小鼠,qRT-PCR验证各组黑质、海马、大脑皮质中AK039862、AK048895表达水平变化(n=4);(2)应用多重荧光原位杂交,探讨10 mg/kg组中AK039862表达的空间(细胞、亚细胞)分布特征;(3)应用CNC、GO、Pathway、RNA-蛋白质相互作用预测(RPISeq)分析预测并筛选出AK039862潜在靶基因;(4)应用qRT-PCR检测各组黑质中靶基因Pafah1b1/Foxa1的mRNA表达情况(n=4)。体外细胞层面:(1)以0、30、60、90、120μM PQ分别处理bv2细胞24、36、48h,CCK8检测细胞增殖活力(n=5);qRT-PCR、WB检测0、30、60μM PQ组中lncRNA-AK039862、Pafah1b1、Foxa1基因mRNA及Pafah1b1蛋白表达水平变化(n=3);(2)使用si-AK039862或pcDNA3.1-AK039862转染bv2细胞,CCK8检测其增殖活力(n=5);(3)使用si-AK039862或pcDNA3.1-AK039862转染bv2后,以0、30、60μM PQ分别处理bv2细胞24、36h,CCK8检测细胞增殖活力(n=5);qRT-PCR、WB检测lncRNA-AK039862、Pafah1b1、Foxa1基因mRNA及Pafah1b1蛋白表达水平变化(n=3);(4)以0、50、100、150、200μM PQ处理mn9d细胞,同时分别使用正常培养基(NM)、bv2细胞制作的炎性条件培养基(CM)培养mn9d细胞24、36h,CCK8检测其增殖活力(n=5);qRT-PCR、WB检测0、50、100μM PQ组中lncRNA-AK039862、Pafah1b1、Foxa1基因mRNA及Pafah1b1蛋白表达水平变化(n=3);(5)使用si-AK039862或pcDNA3.1-AK039862转染mn9d细胞,CCK8检测细胞增殖活力(n=5);(6)使用si-AK039862或pcDNA3.1-AK039862转染mn9d后,CM培养下,以0、50、100μM PQ分别处理mn9d细胞24、36h,CCK8检测细胞增殖活力(n=5);qRT-PCR、WB检测lncRNA-AK039862、Pafah1b1、Foxa1基因mRNA及Pafah1b1蛋白表达水平变化(n=3)。结果体内动物层面:既往研究结果表明,10 mg/kg PQ、30 mg/kg MPTP组处理组小鼠成功建立PD模型。(1)AK039862在10 mg/kg PQ,30 mg/kg MPTP组黑质中表达上调(P<0.001),海马中表达下调(P<0.001),大脑皮质中未变化;AK048895在10 mg/kg PQ、30mg/kg MPTP组黑质中表达上调(P<0.05),海马、大脑皮质中表达下调(P<0.05)。(2)AK039862广泛分布于10mg/kg PQ组小鼠黑质中,且分布于多巴胺能神经元及其他神经元胞质中。(3)Pafah1b1、Foxa1等基因为AK039862潜在的靶基因。(4)Pafah1b1-mRNA在10 mg/kg PQ、30 mg/kg MPTP组黑质表达上调(P<0.01);Foxa1-mRNA在5、10 mg/kg PQ、30 mg/kg MPTP组黑质中表达上调(P<0.01)。体外细胞层面:(1)PQ抑制bv2增殖,且存在剂量反应关系;AK039862、Pafah1b1-mRNA表达下调(P<0.05),Pafah1b蛋白、Foxa1-mRNA表达上调(P<0.05)(2)转染si-AK039862,bv2增殖活力无变化;转染pcDNA3.1-AK039862,bv2增殖活力下降(P<0.05)。(3)转染si-AK039862,PQ处理bv2中Foxa1-mRNA在24h组表达上调(P<0.05),36h组表达下调(P<0.05)。转染pcDNA3.1-AK039862,PQ处理bv2中Foxa1-mRNA、Pafah1b1基因的mRNA及蛋白质表达上调(P<0.05);且在36h组中,细胞增殖活力下降(P<0.05)。(4)NM-PQ、CM-PQ抑制mn9d细胞增殖,并存在剂量反应关系;且在36h处理组内,NM与CM组间增殖活力有差异(P<0.001);NM-PQ处理mn9d中Pafah1b1表达下调(P<0.01);CM-PQ处理mn9d中AK039862、Pafah1b1-mRNA、Foxa1-mRNA表达下调(P<0.05),Pafah1b1蛋白表达上调(P<0.05)。(5)转染si-AK039862或pcDNA3.1-AK039862,mn9d增殖活力无变化。(6)转染si-AK039862,CM-PQ处理mn9d中Pafah1b1-mRNA表达下调(P<0.01),Foxa1-mRNA、Pafah1b1蛋白表达上调(P<0.01);并在36h处理组中,细胞增殖活力上升(P<0.01);转染pcDNA3.1-AK039862,CM-PQ处理mn9d中Pafah1b1-mRNA、Foxa1-mRNA表达下调(P<0.05),Pafah1b1蛋白在24h处理组中表达下调(P<0.05);36h处理组中表达上调。结论根据以上结果,可得出以下结论(1)LncRNA-AK039862广泛分布于小鼠黑质、海马、大脑皮层中,并表达于PQ处理的多巴胺能神经元胞质中;AK039862在PQ处理的小鼠黑质组织中表达上调,靶基因Pafah1b1、Foxa1的mRNA在PQ致PD小鼠模型黑质中分别表达上调、下调。(2)上调的AK039862在PQ处理的bv2细胞中抑制增殖;下调的AK039862在CM-PQ处理的mn9d细胞中促进增殖。LncRNA-AK039862在PQ抑制神经小胶质细胞或/和多巴胺能细胞增殖活力中起到协同作用。(3)LncRNA-AK039862可在PQ处理的神经小胶质细胞中正向调控Foxa1基因转录过程,并促进Pafah1b1转录、翻译过程;AK039862可在CM-PQ处理的多巴胺能神经细胞中反向调控Foxa1基因转录过程,并作用于Pafah1b1基因转录及转录后过程中。