【摘 要】
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目的:探究舌鳞状细胞癌中RNA结合蛋白HuR(ELAVL1)对端粒酶活性和端粒长度的影响及作用机制。方法:1.收集2018年间于我院行舌鳞癌切除术患者的新鲜癌症组织及周围癌旁组织,用端粒重复序列扩增方法(TRAP)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其端粒酶活性和HuR的蛋白表达水平。2.用RNA-pulldown实验和RNA免疫沉淀法(RNA-IP)来检测HuR与端粒酶核心成分TER
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目的:探究舌鳞状细胞癌中RNA结合蛋白HuR(ELAVL1)对端粒酶活性和端粒长度的影响及作用机制。方法:1.收集2018年间于我院行舌鳞癌切除术患者的新鲜癌症组织及周围癌旁组织,用端粒重复序列扩增方法(TRAP)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其端粒酶活性和HuR的蛋白表达水平。2.用RNA-pulldown实验和RNA免疫沉淀法(RNA-IP)来检测HuR与端粒酶核心成分TERC的结合程度。3.在舌鳞癌细胞SCC25细胞系中敲低HuR,用Western blot和实时荧光定量法(qPCR)分别检测其对端粒核心成分TERT和TERC的影响。4.在舌鳞癌细胞SCC25细胞系中敲低HuR,用RNA-pulldown法检测敲低HuR对TERC和TERT结合的影响;同时,用TRAP法检测敲低HuR对端粒酶活性的影响。5.在SCC25细胞中长期敲低HuR用DNA免疫印迹法(Southern blot)检测其对端粒长度的影响。结果:1.舌鳞癌患者癌组织中端粒酶活性以及HuR的表达水平都比癌旁组织中的高,且具有统计学意义(P<0.05)。2.用RNA-pulldown和RNA-IP证实了HuR能够和端粒酶RNA TERC结合。3.在SCC25细胞中敲低HuR并不影响TERT和TERC水平的表达,但是减弱端粒酶核心成分TERC与催化亚基TERT的结合,进而可以影响端粒酶活性。4.长期敲低HuR的SCC25细胞端粒明显缩短。结论:舌鳞癌中RNA结合蛋白HuR可通过结合端粒酶RNA TERC上影响端粒酶核心成分的组装,进而影响端粒酶活性和端粒长度。
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