目的：　　大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesen-chymal stem cells BMSCs）种植于大鼠膀胱无细胞基质框架(Bladder acellular matrix graft，BAMG)上培养,体外构建BMSCs-BAMG组织工程复合物，探索更为理想的膀胱修补材料。　　方法：　　1.BMSCs的分离和鉴定：采用全骨髓贴壁法，在无菌环境下解剖出大鼠的股骨，获取骨髓细胞，置于含有DMEM培养液的培养瓶内，于CO2培养箱中培养，每间隔24h更换细胞培养液，未贴壁的细胞和杂质随培养液的更换而不断去除，待贴壁细胞融合成片后对细胞进行消化传代，使贴壁细胞不断纯化。分别在倒置相差显微镜和扫描电镜下观察培养的贴壁细胞形态。流式细胞仪(FACS Calibur)测定P3代贴壁细胞表面标志CD29、CD44、CD34的表达情况。　　2.BAMG的制备：应用物理法（反复冻融）和化学法（叠氮钠、胰蛋白酶、DNA酶）相结合制备BAMG。分别肉眼观察、显微镜观察、扫描电镜观察BAMG的结构形态。　　3.BMSCs-BAMG复合物的构建：①将同期培养的P3代BMSCs分为实验组和对照组，实验组细胞种植于BAMG上，对照组细胞单纯种植于培养皿上，经培养后消化计数细胞，分别绘制两组细胞的生长曲线，评价制作的无细胞膀胱基质框架是否影响细胞的增殖生长。②将P3代BMSCs种植于BAMG上培养7d，倒置相差显微镜观察BMSCs在BAMG上的生长情况，对构建的BMSCs-BAMG复合物进行组织切片HE染色，显微镜观察复合物的组织结构。　　结果：　　1.BMSCs培养分离纯化结果：光学显微镜观察：骨髓细胞刚开始为漂浮生长，24h后出现贴壁生长，5d后贴壁细胞呈集落状生长，细胞呈长梭状。14天左右，贴壁细胞融合成片，经消化传代，细胞分裂增殖速度加快，约4-5天传代一次；扫描电镜观察：贴壁细胞呈现长梭状。FACS Calibur测定显示CD29的阳性率为90.8％，CD44的阳性率为91.6%，CD34阳性率为3.5%。　　2.BAMG的制备：肉眼观察：呈乳白色，纤薄；HE染色组织学观察：BAMG呈现为粉红色的疏松条索状，排列不规则，未见细胞存留；扫描电镜可见交织成网状的纤维条索，较疏松，无细胞附着。　　3.BMSCs-BAMG复合物：光学显微镜观察发现有大量长梭状BMSCs在BAMG表面生长，融合成片。HE染色组织学观察见在BAMG粉红色纤维网架中可见蓝染的BMSCs细胞核。BMSCs-BAMG共同培养组与单独BMSCs培养组的细胞生长曲线无明显差异。　　结论：　　全骨髓贴壁培养法可作为获取BMSCs的有效方法，应用物理法（反复冻融）和化学法（叠氮钠、胰蛋白酶、DNA酶）相结合能成功制备BAMG。BMSCs与BAMG一起种植培养,可体外构建BMSCs-BAMG组织工程膀胱复合物，进而为膀胱修补替代的动物实验研究奠定基础。