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水飞蓟宾(Silybin,Sily)是从菊科植物水飞蓟中提出的主要有效成分,是由1分子紫杉叶素(taxifolin,类黄酮组分)和1分子松柏醇(coniferylalcohol,木酚素组分)构成。药理实验表明,水飞蓟宾具有清除活性氧、对抗脂质过氧化、抑制5’-脂氧合酶、保护肝细胞膜、促进肝细胞修复、再生、抗肝纤维化等作用,临床上主要用作急、慢性肝炎,酒精性及中毒性肝损害,脂肪肝及早期肝硬化等肝病的治疗。由于水飞蓟宾难溶于水及一般有机溶剂,口服吸收差,因此生物利用度较低。早年也有科研工作者研制了水飞蓟宾葡甲氨盐注射剂,但是由于其水溶液不稳定；pH值在11左右,注射时局部刺激性较大而很少被应用。因此需要寻求新的制剂以克服水飞蓟宾水溶性差带来的疗效和临床应用的问题。
本课题采用现代靶向制剂技术,以水飞蓟宾(Silybin,Sily)为模型药物,以具有良好的生物相容性和生物可降解性单硬脂酸甘油酯和中链脂肪酸甘油酯为载体材料,采用乳化蒸发一低温固化法制备水飞蓟宾纳米脂质载体(Silybin-loadednanostructuredlipidcarriers,Sily-NLC)。实验以包封率为主要考察指标,通过均匀设计法对处方工艺进行优化,确定最佳处方工艺,并系统的研究了Sily-NLC冻干粉针剂的制备、处方及工艺,考察了制剂的体外释放特性以及体内分布和药动学特征。以期通过肝靶向分布达到提高Sily治疗肝脏疾病的效果,降低其毒副作用的目的。
通过均匀设计优化的最佳处方工艺为药脂比为1:20,液态脂质/固态脂质比为1:5,表面活性剂用量为300mg,1.5％稳定剂(PluronicF68),搅拌速度1000rmp,乳化温度为75℃。优化工艺操作简单,所制备的Sily-NLC包封率稳定,平均包封率(91.52±1.76)％,载药量为(4.55±0.08)％。透射电镜下观察所得纳米粒为类球形,纳米粒彼此不粘连,粒径分布的范围较窄,平均粒径为235.9nm,Zeta电位为-20.57mV,pH值为7.19左右。
为提高所制备Sily-NLC的储存稳定性,本文进一步对所制得的Sily-NLC进行了冻干处理,以外观、色泽、再分散性为评价指标,将Sily-NLC混悬液制成冻干粉针剂,确定其冻干工艺为:在优化工艺下制备的水飞蓟宾纳米脂质载体中加入6％甘露醇作为支架剂,振摇使溶解,分装于10ml西林瓶中,置-80℃的超低温冰箱中冷冻24h,取出,然后迅速移入冷冻干燥机中,-40℃、0.10mbar条件下冻干48h,即可得Sily-NLC的冻干品。质量评价结果表明冻干过程对药物的粒径、载药量、包封率、Zeta电位及pH值影响较小。对冻干品的DSC和X-射线衍射分析结果表明,制成纳米粒后药物被载体包裹或吸附,不再是单纯的混合,药物不是以晶体结构存在,即Sily-NLC中形成了新的物相。用离心超滤法对Sily-NLC冻干粉针剂的体外释药特性进行了研究,结果表明Sily-NLC的体外释药具有缓释制剂特征,可用双指数方程拟合,方程为1-Q％=0.7925e-0.1059t+0.5020e-0.0359,rα=0.9991,rβ=0.9965。以Sily-NLC的外观、再分散性、含量、pH和包封率等为指标,评价了Sily-NLC冻干针剂的初步稳定性,结果显示Sily-NLC冻干粉在室温(25℃左右)、冷藏条件(4℃左右)条件下放置三个月,其物理、化学稳定性良好。
本文采用HPLC法,分别测定了小鼠尾静脉注射Sily-Sol和Sily-NLC后在体内的组织分布情况,结果表明水飞蓟宾纳米脂质载体能够使Sily靶向浓集于吞噬细胞丰富的肝、肺中,并明显延长Sily在这些组织中的作用时间,从而有利于提高Sily的治疗效果,具有重要临床意义。
在家兔体内的药物动力学过程,结果表明Sily-Sol与Sily-NLC的血药浓度-时间曲线有显著不同。Sily-Sol组的主要药动学参数为t1/2z=1.233h,MRT=1.620h,清除率CLz=1.342L·h-1·Kg-1,AUC为2.979h-μg·ml-1。Sily-NLC组的主要药动学参数为t1/2z=2.747h,MRT=7.895h,清除率CLz=0.638L·h-1·Kg-1,AUC为6.267h·μg·ml-1。分析结果可知,Sily-NLC能够显著延长Sily在小鼠体内的半衰期和体内滞留时间,AUC显著增高,清除率明显降低,说明将Sily制成Sily-NLC后,有助于提高药物的生物利用度,并发挥长效作用。以水飞蓟宾为模型药物制备纳米脂质载体的研究目前国内外尚未见报道,本文的研究成果为难溶性药物注射剂的开发提供了思路,并对治疗肝病药物水飞蓟宾注射剂的临床开发应用有着重要的意义。