【摘 要】
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本实验以GFP-α-tubulin-6转基因拟南芥为材料,利用药理学实验及激光扫描共聚焦显微技术研究了多种蛋白激酶及蛋白磷酸酶抑制剂对拟南芥保卫细胞气孔开度及微管排布的影响。
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本实验以GFP-α-tubulin-6转基因拟南芥为材料,利用药理学实验及激光扫描共聚焦显微技术研究了多种蛋白激酶及蛋白磷酸酶抑制剂对拟南芥保卫细胞气孔开度及微管排布的影响。结果如下:1)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂星型孢菌素(staurosporine,STS)和酪氨酸蛋白激酶抑制剂三羟基异黄酮(genistein)均能促进光照下气孔开放,微管特异性抑制剂长春花碱(vinblastine)和微管稳定剂紫杉醇(taxol)能分别减弱和增强这种促进作用;但是两种激酶抑制剂处理前后开放气孔保卫细胞中微管列阵的排布激光共聚焦显微镜下尚未观察到明显变化。2)1/2A磷酸酶抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)、花萼海绵诱癌素A(calyculin A,CalA)和酪氨酸蛋白磷酸酶抑制剂氧化苯胂(phenylarsine oxide,PAO)均能抑制光照诱导的气孔开放,其中1/2A型磷酸酶抑制剂的作用程度更显著一些,并且微管特异性药物长春花碱和紫杉醇同样能分别增强和削弱它们的抑制作用。激光共聚焦扫描显微镜下观察,经3种磷酸酶抑制剂处理后,光照诱导的正常开放气孔保卫细胞中微管骨架整齐浓密的辐射状组织排布均发生明显改变,其中1/2A型磷酸酶抑制剂作用下,保卫细胞微管以交错网状及解聚态两种排布为主,而酪氨酸蛋白磷酸酶抑制剂PAO作用下,绝大多数微管主要表现为解聚成弥散状随机充满整个细胞。以上结果表明光照诱导气孔开放过程中,蛋白磷酸化可能通过对保卫细胞微管骨架的动态调节发挥作用;并且,微管的动态组织行为在蛋白处于磷酸化状态时,与蛋白去磷酸化相比,表现得更活跃一些。
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